高速逆流色谱法分离纯化环抱菌素.PDFVIP

.48。 中国抗生素杂志2005年1月第30卷第1期 文章编号:1001-8689(2005)01-0048-04 高速逆流色谱法分离纯化环抱菌素 方东升 谢阳 陈勇 陈晓明 郑卫 (福建省微生物研究所，福州350007) 摘要:应用高速逆流色谱法对环抱菌素的分离纯化进行研究，选择石油醚一丙酮一水(3:3:2,V/V)为两相体系，计算环抱 菌素A,B,C,D在两相体系中的分配系数，以上相为固定相，下相为流动相进行高速逆流色谱分离纯化，高效液相色谱法测定单组 分纯度。实验结果表明一次高速逆流色谱即可将环抱菌素粗品分离纯化，得到纯度98.5%以上的环抱菌素A,B,C,D单组分，收率 达 85%以上。 关键词 : 高速逆流色谱 ; 环抱菌素;分离纯化 中图分类号:R979.5 文献标识码 A Separationofcyclosporinsbyhighspeedcountercurrentchromatography FangDong-sheng，XieYang，ChenYong， ChenXiao-ming and ZhengWei (FujianInstituteofMicrobiology, Fuzhou350007) ABSTRACT Highspeedcountercurrentchromatography(HSCCC)wasusedfortheseparationof cyclosporinA，B,C，Dbyusingpetroleumether/acetone/water(3，3，2，V/V)astwo-phasesolvent system.Thelowerphasewasselectedasthemobilephaseandupperphaseasthestationaryphasebasedonthe calculatedpartitioncoefficient(K)ofcyclosporinA，B,C，andD.Thepurityofseparatedfractionswasana- lyzedbyhighperformanceliquidchromatorgraphy(HPI-C).ExperimentdatashowsthatcyclosporinA，B,C andDcanbeseparatedthroughonerunofHSCCCwithhighpurity(98.5%)andrecoveryrates(85%). KEYWORDS HighSpeedCountercurrentChromatography(HSCCC);Cyclosporins;Separationand purification 环抱菌素是由真菌产生的一组环状十一肤物质， 素的方法主要有凝胶色谱，硅胶层析和高效液相色谱 由瑞士Sando:公司于 1976年首次报道，并从其产生 等[[1]。由于环抱菌素同系物在结构上往往只是个别氨 菌多孔木霉(Tolypocladiuminflatuin)的发酵液中分 基酸甚至氨基酸构型的差异[[1.8]，采用上述基于液一固 离出二十多个同系物[[I]，此后又陆续从其它真菌中寻 色谱的分离方法往往很难将这些组分完全分离开来， 找到环抱菌素的产生菌[2^67。环抱菌素具有广泛的生 因此探索环袍菌素新的分离技术具有很强的应用价 物活性，如环抱菌素A(CyA)已作为免疫抑制剂广泛 值。 应用于器官移植时的抗排斥反应[[1]，环抱菌素H是含 高速逆流色谱(HighSpeedCountercurrentChro- 7个跨膜区域的G一蛋白藕合受体— 甲酞化多肚受 matography,HSCCC)是国际上于20世纪80年代以 体的强抑制剂[[7.8]，环抱菌素D的衍生物PSC-833可