白斑综合征病毒(WSSV)在几种经济类淡水甲壳动物中的感染与流行调查研究.pdfVIP

一294一 江苏农业科学2010年第3期 薛晖，丁正峰，周 白斑综合征病毒(WSSV)在几种经济类淡水 甲壳动物中的感染与流行调查研究 薛 晖，丁正峰，周 刚，杨林，唐建清 (江苏省淡水水产研究所，江苏南京210017) 摘要：2007年江苏、浙江等地暴发养殖克氏原螯虾白斑综合征病毒(whitespotsyndrome 该病在江苏地区进一步蔓延，调查发现，在一些虾蟹混养池塘，中华绒螯蟹也有批量死亡的现象。本研究通过采集发 病池塘中的克氏原螯虾、中华绒螯蟹与日本沼虾，将上述3种淡水甲壳动物进行超薄切片透射电子显微镜观察，同时 粒，PCR检测进一步证实已感染WSSV。流行病学调查及人工回感试验表明该病毒对克氏原螯虾和中华绒螫蟹具有 较强毒性，日本沼虾则无明显发病症状。 关键词：白斑综合征病毒(WSSV)；淡水甲壳动物；感染；调查 中图分类号：$941．41文献标志码：A 文章编号：1002—1302(2010)03—0294—03 0．5 近年来，克氏原螯虾(别名小龙虾。P，砌舶。哪clarkii)、mill大小的组织块，置于4％戊二醛溶液中固定后经PBS 中华绒螯蟹(别名河蟹，Eriocheirsinensis)、日本沼虾(别名青冲洗3次，1％锇酸固定2h，PBS冲洗3次，丙酮系列脱水， 虾，Macrobrachium 812树脂包埋，37℃过夜，60℃温育12h以上。超薄 nipponensis)的消费量不断增加。为了提高Epon’s 养殖效益，生产中普遍采取多品种混养的养殖模式，如克氏原 切片厚度为50—100nln，切片经醋酸双氧铀和柠檬酸铅双重 螯虾与中华绒螫蟹混养等…。自2007年5月份开始，在江苏染色之后在H一600型透射电子显微镜下观察并拍照。 南京、盱眙、淮安市楚州区、金湖、泗阳、江都等地的克氏原螯 1．3分子生物学检测 虾养殖塘口先后发生不明病害，克氏原螯虾死亡率最高达 在组织病理切片中观察到类似WSSV病毒颗粒后，设计 50％，处于相同养殖塘中的中华绒螯蟹和日本沼虾同时出现 出WSSV特异性引物，进行PCR扩增验证。为了解该病毒在 死亡。本研究从江苏江都、南京、金湖、盱眙等地发病养殖池 淡水甲壳动物不同组织间的侵染特性，本研究还分别对患病 塘5次共采集100余只克氏原螯虾、中华绒螯蟹、日本沼虾样克氏原螯虾的鳃、心肌、肠道、神经、肌肉等不同组织进行 品，从中同时检测出对虾白斑综合征病毒(whitespotsyn· drome NV)，检测方法参照文献[3—4]。 virus，wssv)，证明该病毒即为目前生产上几种主要淡 水甲壳动物大量死亡的病原。WSSV为一种无包涵体病毒，1．3．1 引物设计与合成 地理分布广，流行范围大，传染性强，对发病虾致死时间短，目 前尚无有效的治疗药物，还不能有效地控制疫情拉。1。本研 究结果为淡水甲壳动物养殖生产中WSSV的诊断与检测及其 流行控制提供了科学依据。 300 bp。 1材料与方法 经、鳃、肝脏等组织少许于离心管中，加1．2mL消化液 mmoL／L mmoL／L 1．1样品采集及养殖环境调查 (100 NaCl；10 患病克氏原螯虾、中华绒螯蟹、日本沼虾采自江苏盱眙、 25 h，加入1％ 江都、金湖、南京等地的养殖场，所有样品均用保温箱加冰保 500肛g／mL蛋白酶K)，将组织捣碎，65℃温育1 存。在取样过程中，测量和记录养殖池水的常规水质指