试验七pH对淀粉酶活性的影响.PPT

实验四-4 pH对淀粉酶活性的影响 一、实验目的 了解pH对酶活性的影响及最适pH的定义。 二、原理 酶的催化活性与环境pH有密切关系，通常各种酶只在一定pH范围内才具有活性，酶活性最高时的pH，称为酶的最适pH，高于或低于此pH时酶的活性都逐渐降低。不同酶的最适pH不同。酶的最适pH不是一个特征性的物理常数，对于一个酶，其最适pH因缓冲液和底物的性质不同而有差异。 三、试剂和器材 1. 试剂 0.3％氯化钠的0.5％淀粉溶液、新鲜唾液、0.2 mol/L磷酸氢二钠溶液、柠檬酸钠溶液、碘化钾－碘溶液 2. 器材 恒温水浴锅 四、 操作步骤 1. 取3个锥形瓶，按下表的比例吸取磷酸氢二钠溶液和柠檬酸钠溶液，制备pH为5.0、6.8、8.0的三种缓冲溶液。 五、注意事项 1. 本实验中的酶反应时间是10min，但实际是随不同的唾液淀粉酶的活性而变化的，所以在实验前先找出准确的保温时间是本实验的关键； 2. 加入酶液后务必充分摇匀，保证酶与全部淀粉溶液接触，反应才能得到理想的颜色梯度变化结果。 六、思考题 1. pH值导致酶活性丧失的分子机理是什么？ 2. pH值改变导致的活性丧失， pH值恢复后活性也能恢复吗？ * * 5.0 6.8 8.0 4.85 2.28 0.28 5.15 7.72 9.72 1 2 3 缓冲液pH 0.1mol/L柠檬酸 0.2mol/L磷酸氢二钠（mL） 锥形瓶号 2. 另取3只干净试管，按下表操作。 1 1 1 0.5%淀粉溶液/mL 2 - - pHh8.0缓冲溶液/mL - - 2 pH5.0缓冲溶液/mL - 2 - pHh6.8缓冲溶液/mL 2 2 2 立即加碘化钾－碘溶液/滴 记录观察结果 充分摇匀，置37 ℃水浴保温10 min，到达保温时间后，每隔1min依次取出 1 1 1 每隔1min逐管加入唾液稀释液/mL 3 2 1 试管编号 试剂处理