丹皮降糖活性及化学成分研究.docVIP

精品论文 参考文献 丹皮降糖活性及化学成分研究 大连医科大学附属第一医院 116600 摘要：目的：研究丹皮降糖活性部位及化学成分。方法：以糖尿病小鼠为动物模型，对丹皮不同提取物进行降糖活性评价。通过硅胶柱色谱、反相柱色谱等方法对牡丹皮有效成分进行分离，通过1H-NMR、13C-NMR、薄层色谱对分离的3个化合物进行结构解析。结果：丹皮水提取降糖活性明显，50%及95%乙醇提取物降糖活性较弱。得到化合物分别为（+）-儿茶素、丹皮酚、没食子酸。结论：丹皮水提物具有降糖活性。 关键词：丹皮；糖尿病；化学成分 丹皮为毛茛科芍药属植物牡丹（Paeonia suffruticosa Andr.）的于燥根皮，有清热凉血、活血消瘀的功效，主要用于治疗温毒发斑，疮疡痈肿，经闭痛经，跌打损伤等症。近年来，国内外对该植物的药理活性研究发现其在降糖、抗菌、消炎、治疗心血管疾病等方面具有较好疗效[1]。本研究对牡丹皮的活性部位进行确定，并进行化学成分分离及结构鉴定 实验 1仪器与材料 四氧嘧啶（Fluka公司），葡萄糖试剂盒（北京北化康泰临床试剂有限公司）实验动物：健康昆明种小鼠，♂，体重25-33g，购于沈阳药科大学实验动物中心。离心机（长沙湘仪离心机有限公司）、紫外分光光度计（Unico-2100）。牡丹皮购于沈阳天益堂大药房；柱色谱硅胶及薄层色谱硅胶购于青岛海洋化工有限公司；其它化学试剂均购于天津四友化学试剂有限公司。 2 实验方法 2.1 牡丹皮粗提物的制备 取干燥的牡丹皮约500g，共三组，分别以蒸馏水、50%乙醇、95%乙醇回流提取三次。过滤，蒸干，真空干燥后得丹皮粗提物。 2.2 降糖评价方法 取100只健康的昆明种雄性小鼠，体重25-33g。分为五组：正常组、阴性对照组、蒸馏水提取组、50%乙醇提取组、95乙醇提取组，每组20只分笼饲养3天。各组小鼠隔夜禁食不禁水12h。尾静脉注射1%四氧嘧啶的生理盐水溶液，注射容量为0.07ml/mg，注射后恢复正常饮食，并观察造模小鼠体重变化。注射后72h，再次让所有小鼠禁食不禁水6h。眼眶取血，按GOD法测定血糖值。筛选FPGge;11.0mmol/l者作为糖尿病小鼠。 将造模成功小鼠重新分组。正常组不给药，阴性组为0.5%CMC-Na液，各提取物组分别给药200mg/kg。药物以5%CMC－Na为助悬剂。连续给药两周，每周测定一次空腹血糖值FPG。每次测定FPG前均禁食禁水6h，并于取血前1h末次给药。 2.3提取与分离 干燥的丹皮（6.0 kg），水回流提取3次，每次2小时，提取物回收至无醇味后补加水至2L通过大孔树脂，先用水洗脱至样品流出量减少，再用95%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱部分，回收溶剂，得浸膏。浸膏经硅胶柱色谱，氯仿-甲醇梯度洗脱，继以正相硅胶分配柱色谱、反相ODS柱色谱等方法，分离得到3个化合物， 3 结果 3.1丹皮提取物降糖活性测定 造模后小鼠食量明显增加，鼠笼垫料易湿，说明小鼠出现了“三多一少”现象。造模后部分小鼠空腹血糖值FPGgt;11.1mmol/l，表明造模成功，采用糖尿病病理模型小鼠进行丹皮不同提取部位进行降糖活性评价，结果见表1。 3.2化合物结构确定 化合物1：白色粉末。13C-NMR（CD3OD）delta;：83.0（C-2），69.1（C-3），28.9（C-4），157.3（C-5），95.8（C-6），156.9（C-7），96.5（C-8），101.1（C-4a），157.4（C-8a），132.5（C-1rsquo;），115.6（C-2rsquo;），146.5（C-3rsquo;），146.5（C-4rsquo;），116.4（C-5rsquo;），120.3（C-6rsquo;）。13C NMR数据与文献[2]对照一致，鉴定化合物1为（+）-儿茶素。 化合物2：白色针状结晶（氯仿），与三氯化铁反应显蓝黑色。ESI-MS m/z：167[M+H]+，189[M+Na]+，205[M+K]+。与标准品TLC的Rf值及显色行为一致，故化合物2鉴定为丹皮酚。 化合物3：白色固体，ESI-MS m/z：209[M+K]+。1H-NMR（CD3OD）delta;：7.04（2H，s，H-2，6）。13C-NMR（CD3OD）delta;：121.9（C-1），110.3（C-2，6），146.4（C-3，5），139.6（C-4），170.4（CO）。与标准品TLC的Rf值及显色行为一致，故化合物3鉴定为没食子酸。 4 讨论 实验结果表明，丹皮不同溶媒提取物均具有