猪繁殖与呼吸综合征病毒PRRSVS1株GP3蛋白的原核表达与纯化.pdfVIP

第六次全国会员代表大会暨第11次学术研讨会 的主要毒力基因，同时也是病毒复制的非必需基因，TK-表型的PRV变异株在神经细胞中的复制能力大为 减弱，故TK基因多年来一直成为构建PRV基因缺失疫苗的首选靶基因。本研究室己构建以TK基因为同 源臂的伪狂犬通用转移载体。利用此通用转移载体可构建双价及多价重组病犁“丌。本试验对此通用转移 E2，PRRSV 载体进行了改造，构建了以lacZ为筛选标记并同时表达CSFV GP5基因的三基因转移载体， 以脂肢体为介质包裹质粒载体DNA与PRV基因组共转染VERO细胞，待细胞完全病交后收获毒液。在 X．gal存在的条件下，挑选蓝色蚀斑传代，进行数次蚀斑克隆传代筛选并纯化重组病毒，同时利用Western 免疫印迹试验与间接免疫荧光试验检测E2与GP5的表达情况，并对重组病毒的生物学特性进行了初步分 析。 E2与PRRSVGP5特异性引物PCR扩增得到目的的 进行三轮的噬斑纯化后提取病毒DNA，经CSFV 应条带，利用PRRSV高免血清从重组病毒感染的细胞中检测到大小约为34ku的反应条带，结果表明GP5、 E2基因都获得了表