微生物学检验(第3版)2012肺炎克雷伯与痰液标本检查.ppt

* 痰液和呼吸道标本的微生物检查及肺炎克雷伯菌培养鉴定 临床微生物与免疫学教研室 肺炎克雷伯菌革兰染色 肺炎克雷伯菌荚膜染色 肺炎克雷伯菌的菌落特征（血琼脂平板） 肺炎克雷伯菌的菌落特征（MAC） 肺炎克雷伯菌粘丝试验 肺炎克雷伯菌KIA（A A＋＋ ）、MIU（－－＋） * 器材和试剂 1、标本：痰液标本 2、菌种：肺炎克雷伯菌 3、培养基：血平板、中国蓝平板、克氏双糖斜面培养基、半固体培养基、微量生化管等。 * 4、试剂：氧化酶纸片、3%过氧化氢、革兰染色液、无菌生理盐水及生化管配套试剂。 5、其它 ：显微镜、培养箱、小试管、载玻片、接种针、接种环、酒精灯、火柴、非发酵菌生化编码表等。 器材和试剂 * 1. 鼻咽拭子 采集时，患者用清水漱口，对光而坐，头向上仰张大口，用压舌板轻压舌根，取无菌鼻咽拭子绕过悬雍垂，在鼻咽腔、悬雍垂后侧反复涂抹数次小心取出，避免接触口腔部其他组织。 2．咽拭子 将拭子用无菌生理盐水湿润，用压舌板轻压舌根，暴露整个口咽部。先用拭子轻擦扁桃体表面后弃去，再取1支湿润的拭子轻压扁桃体，擦取挤压出的分泌物，或擦取伪膜等病变部位。 标本的采集 * * 3. 痰液标本 （1）自然咳痰法：受检者用清水溯口数次后，用力咳嗽自气管深部将痰咳出吐至无菌容器中。对痰量少或无痰等咳痰困难者，可雾化吸入45℃左右的10%氯化钠水溶液，使痰容易排出。对于幼儿，可轻轻压迫胸骨上部气管，使其咳嗽而取之。 标本的采集 * （2）气管镜采集法：用气管镜在肺部内病灶处直接吸取标本，或用气管刷采取标本。 （3）气管或环甲膜穿刺法：主要用于厌氧菌培养。 标本的采集 * 革兰阳性细菌 革兰阴性细菌 正常菌群 α和γ链球菌、微球菌、表皮葡萄球菌、四联球菌、白喉以外的棒状杆菌、乳杆菌 除脑膜炎和淋病奈瑟菌外的其他奈瑟菌、其他嗜血杆菌 上呼吸道常见致病菌 化脓性链球菌、金黄色葡萄球菌、白喉棒状杆菌、结核分枝杆菌、白色念珠菌 脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌、百日咳鲍特菌、肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌 下呼吸道常见致病菌 化脓性链球菌 、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、白喉棒状杆菌、结核分枝杆菌、厌氧菌、放线菌、奴卡菌 脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、产气肠杆菌、嗜肺军团菌 痰液标本常见的分离菌 * 血平板 巧克力平板 中国蓝平板 鼻咽拭子 直接涂片染色检查 革兰染色 异染颗粒 初步报告 白喉棒状杆菌培养 菌落形态、涂片染色 初步报告 生化反应、血清学鉴定 检验程序 常规培养 百日咳杆菌培养 血清斜面培养基 鸡蛋培养基 鲍-金培养基 亚碲酸钾血平板纯培养 菌落形态、涂片染色 * 血平板 巧克力平板 中国蓝平板 普通培养 普通培养 普通培养 35℃、18~24h 35℃、18~24h 35℃、18~24h 痰液标本 肉眼观察 涂片染色观察 初步报告 培养前处理 菌落形态和涂片染色 生化反应、血清学鉴定 报告 检验程序 * 1、肉眼观察：下呼吸道标本为痰液，选取脓血性的痰液用于细菌学检验。异常恶臭的脓性痰，常见于肺脓疡患者，而且可能与厌氧菌有关。痰液中有颗粒状、菌块和干酪样物质可能与放线菌病和曲霉菌感染有关。 痰液标本检验操作流程 * 2、涂片检查：挑选痰液中脓、血性部分涂片，干燥固定后，进行革兰染色镜检。 如发现形态典型、有特殊结构，初步可以确定所属菌属或种的细菌，可直接报告。 如查见革兰阳性葡萄状排列的球菌，可报告“痰液涂片查见革兰阳性球菌，形似葡萄状”； 痰液标本检验操作流程 * 如查见革兰阳性双球菌、矛头状、有明显荚膜时，可报告“痰液涂片查见革兰阳性双球菌，形似肺炎球菌”。 如不能直接确定菌属或种的细菌，可报告“痰液涂片查见革兰×性×菌”。如果痰片中均为鳞状上皮细胞，则应视为不合格标本。 痰液标本检验操作流程 * 3、分离培养： 1）痰液标本的前处理 A. 均质化法：加入等量的PH 7.6 的1% 胰酶溶液，放置35℃、90 min使痰液均质化； 痰液标本检验操作流程 * B. 洗涤法：取无菌平皿4个，加入无菌生理盐水20ml ，将痰液标本放入第1个平皿中，用接种环用力震摇，将脓痰分散为小块悬浮于盐水内，将小块脓痰取出依次放入第2、3、4个平皿中重复以上操作。最后在第4个平皿收集脓痰小块，接