肺动脉平滑肌细胞上TMEM16A的表达及其阻滞剂对细胞增殖的作用.PDFVIP

Hainan Med J, Jun. 2016, Vol. 27, No. 11 doi:10.3969/j.issn.1003-6350.2016.11.002 肺动脉平滑肌细胞上 TMEM16A 的表达及其阻滞剂对细胞增殖的作用 张锋，庞玉生，劳金泉 (广西医科大学第一附属医院儿科，广西 南宁 530021) 【摘要】 目的 研究TMEM16A 在大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)上的表达及其阻滞剂(T16Ainh-A01)对 PASMCs 增殖的作用。方法 组织块贴壁法分离正常大鼠PASMCs ，原代培养。光镜下观察细胞形态，细胞免疫化 学和细胞免疫荧光进行鉴定。细胞免疫荧光检测TMEM16A 在PASMCs 上表达。原代培养的3~6 代PASMCs 分别 在10 μmol/L T 16Ainh-A01、20 μmol/L T 16Ainh-A01 和50 μmol/L T 16Ainh-A01 下培养24 h ，用CCK-8 法检测细胞增殖 情况。结果 倒置显微镜下PASMCs 以长梭形为主，细胞核卵圆形，部分细胞重叠区域呈典型的“峰-谷”状结构。 免疫学检测显示胞浆内与细胞长轴平行的肌丝被染成棕黄色，标记肌丝的红色荧光也与细胞长轴平行，标记细胞 膜上的TMEM16A 的绿色荧光可见表达，而细胞核不染色。CCK-8 实验检测，相对于对照组，10 μmol/L T16Ainh-A01 组细胞活力均数为(96.74 ± 0.92)% ，20 μmol/L T 16Ainh-A01 组均数为(92.21 ± 1.25)% ，50 μmol/L T16Ainh-A01 组均数为(87.41±3.27)% ，差异均具有统计学意义(P0.01)。结论 正常大鼠PASMCs 表达TMEM16A ； T16Ainh-A01 可抑制PASMCs 增殖，其抑制作用呈浓度依赖性；TMEM16A 可能参与调控PASMCs 增殖。 【关键词】 TMEM16A ；肺动脉平滑肌细胞；阻滞剂；细胞增殖；原代培养 【中图分类号】 R-332 【文献标识码】A 【文章编号】 1003—6350（2016 ）11—1727—04 Expression of TMEM16A in pulmonary arterial smooth muscle cells and effect on cell proliferation by a selective TMEM16A inhibitor. ZHANG Feng, PANG Yu-sheng, LAO Jin-quan. Department of Pediatrics, the First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University, Nanning 530021, Guangxi, CHINA 【Abstract 】 Objective To explore the expression of TMEM16A in rat pulmonary arterial hypertension (PASMCs) and effect of a TMEM16A inhibitor (T16Ainh-A01) on cell proliferation. Methods Tissue block anchorage was employed for the primary culture of rat PASMCs. Under light microscope, cell morphology was observed and identified by immunocytochemistry and immunofluorescence. The expre