小白菊内酯对Jurkat细胞增殖和凋亡作用.docVIP

精品论文 参考文献 小白菊内酯对Jurkat细胞增殖和凋亡作用 刘玲 王晓桃 刘健 唐爱林 聂宇薇 　　(桂林医学院附属医院 广西桂林 541001) 　　【摘要】目的: 研究小白菊内酯(parthenolide, PTL)对Jurkat细胞增殖抑制及凋亡的作用及其机制。方法: 以Jurkat细胞为靶细胞,四氮唑蓝(MTT) 比色法测定细胞24h,48h,72h的增殖活性, 应用Annex in V- FITC/ PI 双染法流式细胞术检测药物作用后Jurkat细胞的凋亡率，应用免疫组化法检测药物作用后Jurkat细胞NF-kappa;Bp65蛋白的变化。结果: 5-20mu;mol/L PTL可以明显抑制细胞增殖，对细胞增殖的抑制作用随PTL浓度增加和作用时间延长而逐渐增强(r=0.837,P＜0.01)，PTL的24, 48, 72h的IC50分别为4.71plusmn;1.32、8.11plusmn;1.96、11.4plusmn;1.54umo l/L(P均lt;0.01)。0、5、10umo l/LPTL处理48h,Jurkat细胞的凋亡率分别为4.2plusmn;1.23%、10.5plusmn;2.03%、22.1plusmn;2.28%,(plt;0.01),有统计学意义。0、5、10umo l/LPTL作用于Jurkat细胞24h后的NF-kappa;Bp65的表达率和阳性积分均存在统计差异(plt;0.01)。结论: PTL可通过抑制NF-kappa;Bp65信号通路，抑制Jurkat细胞的增殖活性,并呈明显的浓度依赖性，并诱导其凋亡。本研究结果为临床应用小白菊内酯治疗急性淋巴细胞白血病提供了实验依据。 　　【关键词】Jurkat细胞 小白菊内酯 增殖 凋亡 NF-kappa;B/p65 　　【中图分类号】R55 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2014）15-0280-02 　　本研究以人T-ALL细胞株Jurkat为研究对象，探讨抗白血病的效应，并通过检测核因子kappa;B(factor-kappa B,NF-kappa;B)/p65的活性来探讨其可能的机制，有可能为T-ALL的临床治疗提供一种耐受性高、副作用小的新联合治疗方案。 　　材料与方法 　　1.细胞及试剂来源 人T-ALL细胞株 Jurkat (天津血液病研究所)，小白菊内酯(分子式C15H2003，分子量248.32，成都普瑞法生物科技有限公司) RPMI-Medium1640干粉、胎牛血清(FBS)(杭州四季青公司)；四甲基偶氮唑蓝(MTT)、DMSO溶液(北京SABC公司产品)；鼠抗人单克隆抗体(浓缩型)NF-kappa;Bp65(北京中山公司)，二抗快捷性酶标为羊抗鼠/兔IgG聚合物(福建迈新生物技术开发有限公司)，荧光抗体(美国SantaCruz公司)。6孔、96孔培养板(美国Corning公司)；Annexin V FITC /PI细胞凋亡测定试剂盒(购自美国BD公司)；自动酶标读数仪(国产DG-3022)；流式细胞仪(美国BD公司)。 　　2.细胞传代培养 人T-ALL细胞株 Jurkat从外室引进后，常规离心弃上清，复苏后的细胞在含体积分数10%的加热灭活的胎牛血清(10%FBS)及100U/ml青霉素、100mu;g/ml链霉素的RPMI1640的培养基中，置于37℃、饱和湿度、体积分数为5％的CO2孵箱中培养，每2-3天更换培养基并传代一次。本实验用的细胞均处于对数生长期。 　　3.MTT法计算PTL的各药物浓度对Jurkat细胞的半数抑制浓度(50% inhibitory concentriton,IC50) 和增殖抑制率(inhibtion rate) 取Jurkat细胞株100ul加入96孔平底培养板中，加入不同浓度的PTL(使其终浓度为1、2.5、5、10、20、40mu;mol/L)，使细胞浓度为5times;105/ml，每孔最终体积为200mu;L，每组重复5孔，置37℃、5%CO2培养箱培养48h后，在终止培养前4 h，每孔轻轻吸去上清，用PBS洗涤后再次离心，弃上清，加入150ulRPMI 1640培养液，再加入20ul 0.5%MTT溶液(5mg/ml)，继续放置CO2培养箱培养4h后，放入离心机中800rpm离心5min，弃上清液，加150mu;L/孔DMSO终止培养，轻轻震荡5min，使结晶溶解。置酶联免疫检测仪下测490nm吸光度值(A)，同时设置调零孔，对照孔。细胞增殖抑制率％=[(对照孔A值－实验孔A值)/对照孔A值]times;