胎鼠中枢神经系统神经干细胞的分离培养和诱导分化研究.pdf

蒙古绵羊胚胎小肠的组织学发生 刘晓光 (内蒙古科技大学生命科学学院014030) 运用组织学常规方法研究了蒙古绵羊胚胎小肠各段：即十二指肠、空肠、回肠的组织 学发生。对32--550mm蒙古绵羊胚胎小肠的组织学特征以及主要组织结构如肌层、粘膜肌、 粘膜上皮、杯状细胞、淋巴集结、乳糜管、肠腺、十二指肠腺、肠绒毛等发生发育规律进 行了较详细的研究。结果：32m胚胎小肠各段肌层已分化出内环肌和外环肌；十二指肠、 空肠、回肠在290m胚胎时出现了明显的粘膜肌；粘膜上皮发生发育经历了从单层细胞到 多层细胞再到单层细胞的过程；十二指肠、空肠、回肠在各胚期相继出现了杯状细胞、乳 胎出现了十二指肠腺。 关键词；绵羊胚胎小肠组织学发生 作者简介：刘晓光：男，4l岁，内蒙古科技大学生命科学学院，硕士，副教授 项目来源：内鬟古科技厅自然科学基金 胎鼠中枢神经系统神经千细胞的分离培养和诱导分化 赵慧英张涌。 (西北农林科技大学生物工程研究所陕西橱凌712100) StemCelI 摘要：为了进一步完善神经干细胞(Neural s，NSCs)体外分离培养和谤导分化 Norvous System， 体系，本实验选取胚龄E14一ls的小鼠胚胎，对胎鼠中枢神经系境(Central CNS)大脑皮质NSCs采用机械分离法制成单细胞悬洼，在NSCs无血清生长培养液中进行原代 和传代培养，在分化培养液和纹状体提取注中分剐进行自撩分化和谤导分化培羲；井用免疫姐 织化学法时神经球魔分化细胞进行鉴定．结果：在培养的第2～3d即有悬浮生长的神经球形 d传代1次可传至12代：细胞克隆率可达到95*；原代及传代生 成，并逐渐变大，每5d～7 长的神经球均呈NSCs标志性蛋白一Nestin阳性；神经球或单细胞贴鐾后可分化为神妊元样细胞 和星形胶质样细胞形态；由纹状体提取液组成的多巴胺能神经元诱导液可使14％的NSCs表达 TH。证明分蠢得到县有干细胞特征和多分化潜能的NSCs． 关键词：NSCs太脑多巴胺能神经元分离分化小鼠 ．216． 1992年Stemple等“1从神经嵴分离、鉴定出能产生神经元和雪旺氏细胞的神经嵴干 细胞，这些细胞不仅可以自我更新，而且能够产生具有多分化潜能的细胞，产生仅能定向 生成神经元或胶质细胞的成神经元细胞或成胶质细胞．这一研究成果成为发现NSCs (neural stem 为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的能力，能自我更新并足以提供大量脑组织细胞 的细胞。目前，已经从鸟类、啮齿类、灵长类以及入类的胚胎和成年中枢神经系统的不同 部位分离得到了NSCs，并对其在不同条件下的增殖、分化特性做了较为深入的研究。“1。 对NSCs的研究热点主要集中在：确定NSCs的存在部位；建立NSCs体外培葬的方法：研 究NSCs在发育过程中的迁移、分化和发育机制及规律；将培养得到的NSCs用于动物模型 及临床实验等方面。这些研究都必须首先通过获得NSCs而实现，因此，维持NSCs在体外 培养的干细胞特性，探索较稳定的NSCs的体外分离、培养体系，就成为NSCs研究的首选。 本试验建立了～套NSCs的分离、培养和鉴定的方法，成功地从胚胎小鼠的大脑分离、培 养得到NSgs，并用纹状体提取液诱导其向多巴胺能神经元分化。阻期为阐明神经系统的 发育机制、进行NSCs移植、实现神经系统的退行性疾病的功能重建和神经再生提供健康 丰富的细胞来源。 l材料和方法 1．1材料 1．1．1实验动物昆白一级小鼠，由第四军医大学实验动物中心提供。 SABC试剂盒(武汉博士德)，神经丝蛋白抗体(NF，福州迈新)，胶质纤维酸性蛋白抗体 (GFfiP福州迈新){75cm3培养瓶、6孔、24孔、96孔培养板(Gibco)。 1．2实验方法 l，2．1NSCs的分离培养 液反复冲洗