自体成肌细胞促进周围神经缺损修复的实验研讨.pdfVIP

自体成肌细胞促进周围神经缺损修复的实验研究’ 廖文1 刘淑红2 刘 红2 李章华3 张玉富3 赵永岐2夏仁云1罗永湘1 范 明2 3．华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科，湖北武汉，430030 摘 要 目的：观察自律成肌细胞在神经再生室中的作用，探讨算诈为组织工程的种子细 cellular function 褰、坐骨神经动能糟数测定(sciatic耻rveindex。SFl)、电生理检测、腓肠肌温重、神经 蛆飙擎等观察．蛄最；术詹12周．A、B两组均有再生神经生成，但A纽各项检测指标均优于 生，可阻诈为种子翩胞应用于帮周神经蛆级工程． 关键词神经苒生赢脯细胞姐织工翟 周围{申经缺损的修复仍然是格床面临的难题之一．组织工程化人工神经的研究为修复大段周围神 经缺攒提供了一个新的方向．成飘细胞以肌卫星细胞的形式存在予骨骼与肌中，是肌肉组织工程的种 子细胞弗作为基因载体治疗中搬神经系统疚病[1“3，目前尚未见到应用自体成肌细胞修复周围神经缺 损的研究报道。奉实验通过在神经再生室内植入成肌细胞，观察对神经再生的作掰．旨在寻找一种熊够 很方便得到的神经组织工程种子细胞． 一、材料与方法 1．动物分维 三组，每组10只．将A缎每只动物均予以编号标记，提供肌肉组织后，与其他各级动物在同条件下分 笼喂漭，待动物实验用． 2．成肌细胞的分离、培养和鉴定 细胞。 3．成肌细胞+ECM凝胶的制备 ·91· 定·其余的观察其向胍管分化情况(豳3)． 图l培养5天的成肌棚瞧 图2培券1《天的成胍细胞 嘲3成腿细胞分化成胍管 4．动物实验 l 管内；B组；硅胶管内注满接13稀释后的ECM凝胶fC组：硅胶嚣内注满生理盐水． s．观察指标 个样奉观察5个视野，计算Deslnin缀化染色阳性细胞所占百分硅：。 (2)犬体观察：观察局部伤弱的愈合、艇底溃疡的形成等。浅麻醉下针刺足底观察感觉恢复的状熬 (患肢出现收缩反应)．税察撵生神经的大体形态． nelHvefuction (3)坐骨神经指数(s血tic 大鼠行步态测定，按照＆in公式计算SFl． 问袭示部分神经功俄恢复。 (4)电生理检测：术后12周，漉醒状态下，甩DantecTM型肌电幽仪梭浏患肢小腿三头肌豹肌电 躅．麻醉状态下t暴露术蛔坐骨神经，投测坐骨神经传导速度、复合肌肉动作电位的波幅． ·02· 染色观察再生神经神经纤维的连接状况．行神经细丝蛋白(NF)免疫维化染色．随机选取部分对倜相 同部位的坐骨神经作为对照组观察． 采掰北航医学图像分析管理系统对术后12月备组荐生神经中段的横裁面组织片进行图像分 析．观察搏生神经有效神经截面积，有髓神经纤维数目、有髓神经纤维密度、有髓神经纤维直径、髓 鞘厚度。 PHIL聍S CMl20型透魅电镜观寨再生神经的超馓结构． 6．统计学方法 所有数据用均数士标准豢(；士#)表示，采用SAS6．02软件进行统计学分析． 二、结果 1．D姻min免疫组化鉴定 Desmin染色阳性纲胞(图4)达到97％以上，平均为98．Ol％． 匿4成肌细胞DesIllin免疫组化染色 2．大体观察 。 所有大飘均正棠存活，伤口一期愈合．A、B掰组足底无溃疡形成，C组术后2周左右有轻度溃疡形 及颓端的神经均包绕着由纤维结缔组织形成的包壳，与周围组级无明晟糕连。剪舞并取出硅教管后， A、B两组均可见再生神经远、近蝴与正常神经连接处光滑无断裂，表面可见馓小血管网形成，外形似正 常神经，赢径较芷常的神经千细，A维略租于B组．C缀导管内均充满淡黄色的液体，凭再生神经通过 问隙．