鸡球虫31E和CDPK核酸疫苗的研制及其免疫保护效果.pdfVIP

中国畜牧鲁医学会家畜寄生虫学分会第五次代寰大会曩第八次学术研讨会论文集 原虫部分 鸡球虫3—1 E和CDPK核酸疫苗的研制及其免疫保护效果 周建民，汪明 00094) (中国农业大学动物医学院，1 摘要：应用本实验室克隆的鸡IFN—v基因、鸡柔嫩艾美耳球虫甘肃株3—1E静CDPK基因，单 粒转染入BHK细胞，收集对数生长期的细胞，提取细胞的总RNA，反转录之后使用特异性引物进 行PCR扩增，检测质粒在细胞中的转录情况，琼脂糖电泳检测到各自的特异性条带，说明pcE和 pcC真核重组质粒可在真核细胞中诱导表达蛋白． 采用MTT法对构建的真核表达质粒进行了淋巴细胞转化试验，研究表明，在一免后7天，各 免疫组淋转水平均有不同程度的提高，在二免后7天和感染后7天，各免疫组淋转水平有显著性 提高，说明随着免疫时间的延长及加强免疫后，各免疫组具有较强的诱导鸡的细胞免疫反应的能 果表明，核酸疫苗至少可在体内存在并持续表达1个月． 对所构建的真核表达质粒进#i-T球虫感染鸡的免疫保护研究，在每次核酸疫苗免疫鸡只前对 x 注射部位进行25％蔗糖的预处理，间隔一周两次免疫，二免后7天攻击3104个厨Gs卵囊，7 天后杀鸡观察免疫组的保护效果。结果表明，免疫组与感染对照组相比，均可降低卵囊产量 03．06％)，综合抗 (54．76～80．95％)、降低病变值(35～57．5％)、提高相对增重率(83．41—1 球虫指数(AcI)达到或接近中等(142．41～171．09)的抗球虫效果。 关键词：核酸疫苗，球虫，基因，克隆，免疫保护 鸡球虫病是一种广为发生的原虫病，全球每年因球虫病造成的损失多达20亿英镑(Williams 等1999)。依靠生物技术来制作基因工程疫苗或核酸疫苗成为球虫疫苗的研究热点。入侵相关蛋 白(Invasion—Related Protein)是目前研究较多的球虫抗原，主要包括予孢子表面蛋白、裂殖子 表面蛋白，以及微线、棒状体、折光体、致密颗粒等细胞器抗原。3-1E蛋白和钙调域蛋白激酶 (calmodulin—domain protein (Lillehoj，HyunS．等，2000)，将原核表达的堆型3—1E融合蛋白免疫鸡与感染球虫的对照组相 球虫钙调域蛋白激酶(calmodulin—domain protein 免疫荧光抗体标记研究表明，将子孢子加入体外培养的靶宿主细胞中后，EtCDPK很快就会与集 中于寄生虫顶部的丝状结构相连，当寄生虫进入宿主细胞时，EtCDPK就停留在寄生虫进入宿主细 胞膜的部位，提示Et CDPK在Et入侵宿主细胞时起着关键性的作用。细胞因子可以作为免疫佐剂 促进核酸疫苗的抗球虫作用。 本研究应用已克隆的鸡球虫3一lE基因、CDPK基因和鸡IFN—Y基因，构建了单价、双价和三价的 达质粒进行了淋巴细胞转化试验，观察其细胞免疫情况，同时进行了CDPK基因和3一lE基因在体 内组织的存在及表达情况的监测。将构建的pcC和pcE真核质粒通过转染BIIK细胞，观察了其体 外表达情况。将所构建的真核表达质粒免疫鸡，观察其对鸡球虫感染的免疫保护情况。 中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第五次代衰大会暨第八次学术研讨会论文集 原虫部分 1． 材料 1．1基因cDNA 1．1．1 GS pGEM一3—1E和pGFJPCDPK：为本研究前期构建的分别携带有叵tenella3-1E基 因和CDPK基因的克隆质粒 1．12 lF卜Y：由中国农业大学动物医学院吴志光老师提供 Inv