鸡体偏嗜性密码子优化免疫原基因增强H5亚型禽流感DNA疫苗免疫保护效果.pdfVIP

2004学术年会 免疫原基因的密码子优化可显著改善基因的表达效率。HaasJ(1996)等合成和扩增的哺乳动 物密码子优化的HIV MN株gpl20基因大大提高了体外表达水平，其DNA疫苗显著增强了特异性 用于DNA疫苗或重组病毒活载体疫苗同样取得了显著改善的特异细胞和体液免疫反应。目前几乎 所有的HIV重组疫苗都采用了密码子优化免疫原基因。密码子优化免疫原基因在人的乳头瘤病毒、 狗的乳头瘤病毒、狗的狂犬病以及SARS冠状病毒DNA疫苗相继得到应用。 一般来说，用于试验的DNA疫苗在进行体内免疫保护效力试验前必须首先证明能在体外哺乳动物细 染293T细胞进行短暂表达，间接免疫荧光检测结果表明2种质粒在转染293T细胞24h即可特异的表达， 转染后48 粒均可正确表达大小约为74KDa的HA蛋白，但质粒pCIoptiHA的表达水平高于质粒pOnA。 本试验成功优化与构建了含有鸡体偏嗜性密码子的H5亚型禽流感病毒HA基因optiHA，并成功 及Westem blot方法均检测到了HA蛋白表达产物，结果表明密码子优化的HA基因体外瞬时表达水 平显著高于野生型HA基因，为更进一步的动物免疫试验提供了充分的试验依据和有力的佐证。 参考文献(略) 鸡体偏嗜性密码子优化免疫原基因增强H5亚型禽流感 DNA疫苗免疫保护效果4 姜永萍1，张洪波1，李呈军1，步志高2，张芳芳1，于康震3，陈化兰”‘ 1中国农,2k科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室／鱼医生物技术国家重点实验室 2中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室，哈尔滨，黑龙江， 150001 3农业部畜牧兽医总站，北京，100026 摘要：利用寡核苷酸合成、重叠延伸PCR法及限制酶切法构建了密码子优化的 达载体pCI构建了H5亚型DNA疫苗质粒pCIopfiHA。 鸡，4周后用IOOLD50的HPAlV GD／1／96(H5N1)鼻腔途径进行攻击。结果，间接免疫荧光法和 100pg pCIoptiHA可形成75％的免疫保护，100¨g pCIHA可形成50％的免疫保护；10pgpCIoptiHA 可形成对免疫鸡75％的部分免疫保护，而10pg 表达水平和H5亚型禽流感DNA疫苗诱导的保护性抗体免疫反应水平，增强免疫保护效果。 关键词：禽流感；H5亚型；DNA疫苗：免疫保护 ‘项目简介：国家重点基础研究规划“973”(G1999011902)项目资助。 作者简介：姜永萍(1972一)，女，甘肃会宁人，助理研究员，博士，主要从事禽流感基因工程疫苗及禽流感病毒 分子生物学研究。 ¨通讯作者，Tel／Fax：0451E_m越：hlch朗@hvn．ac卫n。 764囝2004学术年会 H5亚型高致病力禽流感(HPAI)可以感染人并致人死亡。对H5高致病力禽流感，我国现阶段 主要采取扑杀清除和全病毒灭活疫苗免疫相结合的防制策略，实践证明效果良好。但全病毒灭活疫 苗导致免疫鸡与自然感染鸡难于区分，从而干扰常规血清学的流行病学监测。DNA疫苗是防制禽流 免疫保护性和长达一年的HI抗体持续期，但与传统的H5亚型禽流感全病毒灭活疫苗相比，存在免疫 剂量大、使用成本高、难以推广应用的严重缺陷。 编码氨基酸密码子的摇摆性导致了不同物种问细胞在蛋白翻译过程中具有密码子使用的偏嗜 性。鸡与哺乳动物细胞在蛋白翻译过程中具有相同的密码子偏嗜性，但与A型流感病毒保护性免 疫原HA蛋白氨基酸密码子使用频率存在着明显差异。将异源的免疫原基因的密码子优化为免疫 接种动物偏嗜使用的密码子提高抗原表达效率，因而改进DNA疫苗免疫效果已被许多研究所证 进行了体外瞬时表达及SPF鸡免疫保护效果的比较研究。 1材料与方法 1．1病毒和质粒 研究所农业部动物流感重点开放实验室保存；含有野生型HA基因的DNA疫苗质粒pcIHA(即 pCIHA5)由陈化兰研究员构建。 1．2 SPF鸡胚和SPF鸡 由哈尔滨兽医研究所实验动物中心提供，3周龄SPF鸡实验期间饲养于禽病感染实验室的负压 隔离器中。 1．3 HI阳性抗原和二抗