雄性三倍体长牡蛎繁殖潜力的初步研究.pdfVIP

雄性三倍体长牡蝎繁殖潜力的初步研究 丁君’张国范“常亚青 ‘李霞 ‘宋坚’巩宁2 (1.大连水产学院，农业部海水增养殖生态学重点实验室，辽宁大连，116023 2.中国科学院海洋研究所，山东青岛，266071) 摘 要 利用流式细胞仪及镜检对雄性二、三倍体长牡蜘的生殖细胞进行分析，证明雄性三 倍体长牡W可以产生有活力的精子，这些精子可以使正常二倍体卵细胞受精，但从整体看雄 性三倍体长牡砺性腺成熟较二倍体滞后，且同步性差。 关扭词 长牡蜻.繁殖潜力.流式细胞仪 AbstractThereproductivecellofdiploidyandtiploidyPacificoyster,Crassostreagigaswere analyzed.Theresultsshowthatsmallpartofmaletriploi勿oystercanproducelivingspermsand therespermcanmakethenormaldiploidyeggsfertilizeandyieldaneuploidyembryo,butlarge partofthemcanonlyproduceimmaturespermcell.Thetestalsofindthatthematuretimeof maletriploi介gonadislaterthannormaldiploidy,andtheirsynchronizationisnotasgoodas diploidy. keywordsPacificoysterCrassotredgigas,reproductionpotentiality,flowcytometric 国内外很多人做过三倍体长牡场的诱导工作，但在三倍体性腺发育及配子活力方面的研 究，目前仅见Allen等对三倍体的海娜和长牡蝎异常配子的发生进行报道，Coxl4l研究了悉 尼岩牡场三倍体性膝发育情况，姜卫国等对三倍体合浦珠母贝的生殖膝进行了观寮，李 该川对三倍体长牡蚜的性腺发育做了较系统的分析和总结。作者用流式细胞仪对长牡蜘二、 三倍体的性腺细胞进行了初步分析，回答了三倍体长牡砺生殖潜力及性比方面的一些间题， 为进一步研究三倍体长牡骊的生长、萦殖、杂交莫定了理论基础。 1材料与方法 1.1实脸材料 材料取自大连红星养殖公司，其中三倍体长牡砺在1999年春用6--DMAP进行诱导处 理，2000年4-5月在大连水产学院海养樱人工促熟培养。 1.2倍性鉴定方法 取少量姐丝，PartecPAS一ul型流式细胞仪侧其倍性。 1.3性膝现案方法 将长牡拐剖开，观察其性腺发育情况，在显微镜下辨雌雄。 1.4利用旅式翻饱仪对生抽翻.进行分析 用手术刀片割开性膝、DAPI染液冲洗性膝，收集、制样。PartecPAS一m型流式细胞仪 进行侧试。 2 结果 2.1长牡蝠倍性鉴定结果 分析鉴定长牡蜘共 145个，其中三倍体38个，二倍体 107个，三倍体倍化率为 26.2%。二倍体长牡砺中雌雄比接近1:1。三倍体雌雄比为1:18。二者都有雌雄同体现象。 三倍体的雌雄同体率为4%0 2.2 二倍体长牡蝠的性腺观察及利用流式细胞仪对其生殖细胞分析结果 所检测的107个二倍体长牡砺中，有105个达到性成熟，占98%。性成熟的二倍体长 牡w生殖腺很饱满，性腺几乎夜盖整个内脏囊，外观呈乳白色或淡黄色，性腺表面叶脉状生 殖输送管清晰可见，镜下观察精子活力极强。 把正常二倍体长牡砺鳃丝细胞的DNA含量定为200，图I为一典型的二倍体雄性生殖 细胞DNA的相对含量直方图，其中横轴代表DNA的相对含量，纵轴代表细胞数。峰1代 表此时精巢中的大部分细胞已完成减数分裂，成为精子细胞或精子，其DNA相对含量为 1000峰2显示精巢中有部分细胞已经过减数第一次分裂，DNA含量减半至正常体细胞水 平，DNA相对含量为200，为次级精母细胞。峰3显示精巢中有一些细胞的」DNA刚完成复 制，为初级精母细胞，其DNA的相对含量为400。实验证明峰1所占的比例越大，精子的 活力越强。当食物不足或其他原因造成长牡蝠性腺退化时，不但性腺外观饱满度下降，在流 仪图上也显示峰1的比例大大降低，而峰2的比例则增加。因此，定期用流式细胞仪监测长 牡V性腺的发育情况可较好地掌握其人工授精时间。 2.3 三倍体性碑观案及利用流式细胞仪对其生殖细胞分析结果 所检测38个三倍体长牡砺中有36个生殖腺消