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运用致病毒素筛选抗稻曲病突变体 马 慧 陈丽静 刘少霞 姜明兰 钟文田 (沈阳农业大学生物技术中心，沈阳110161) 曲病突变体的筛选的可行性。结果表明，供试的水稻各品种在细胞水平的抗性与田 间的抗性相一致，因而可必以制备的稻曲病菌为选择压力进行抗病突变体的筛选。 对得到的抗性愈伤组织的抗性稳定性鉴定结果表明继代后愈伤组织的抗性仍得到 了保持。 关键词水稻；抗性筛选 稻曲病[ustilaginoidea 发生所以一直未受重视。进入20世纪70年代，随着籼粳杂交及栽培技术的改变，以及高产感 病品种的推广，稻曲病逐渐在我国由南向北蔓延．并呈上升趋势，已成为北方稻区的主要病害 之一。稻曲病不但造成减产，而且病菌产生的有毒物质还会污染稻米，显著降低米质和精米率 并危害身体健康。 草野火病菌毒素相似物混入培养基。以单倍体烟草叶片游离原生质体为材料，选育出了世界上 第一例抗病突变体以来，采用细胞选择方法在玉米、甘蔗、油菜、马铃薯、燕麦、苜蓿、小麦及水 稻等作物育种上陆续取得了成功。这表明以组织培养为基础，以毒素为筛选条件进行抗病育 种是值得进一步探讨的。考虑到常规方法在抗稻曲病育种上的局限．探索用细胞选择法筛选 抗稻曲病突变体，将有着重要的理论和实践意义。 l材料和方法 1．1供试品种和病原菌 以水稻品种“辽粳244”、”秋光”、“沈农611”、“沈农129”愈伤组织为试材。水稻愈伤组织 的诱导、继代按常规方法进行。诱导培养基为MS基本培养基，附加2，4一D2．Omg·L一1， 菌由田间自然发病植株上采得，经室内分离纯化后制备成稻曲病菌粗毒素。 1．2粗毒素对水稻愈伤组织诱导率的影响 以“辽粳244”、“秋光”、“沈农611”、“沈农129”的成熟胚愈伤组织，接种于含有毒素10％ ～50％的诱导培养基上。比较不同水稻品种的诱导率随毒素浓度提高的变化规律。 170 1．3抗性愈伤组织稳定性鉴定 运用间歇法对在筛选培养基上得到的愈伤组织进行抗性鉴定。将从含粗毒素的培养基 理愈伤组织生长量的变化。 1．4试验参数 愈伤组织诱导率=(出愈的外植体数／接种的外植体数)×100％ 愈伤组织生长量=愈伤组织的终重一愈伤组织的始重 相对诱导率=(各处理的实际诱导率／O处理的实际诱导率)×100％ 2结果与分析 2．1粗毒素对愈伤组织诱导率的影响 以“辽粳244”、“沈农129”、“秋光”、“沈农611”为试材，分别接种于粗毒素浓度为0％， 10％，20％，30％，40％，50％的筛选培养基中。结果表明，随着粗毒素浓度的提高各品种愈伤 组织的诱导率都呈下降趋势。“秋光”和“沈农129”相对诱导率的下降趋势要比“辽粳244和 ‘ “沈农611”的平缓，尤其在粗毒素浓度超过30％时．更显示出这种趋势。见表1。 表1 不同浓度靼毒素对意伤组织诱导宰的影响 粗毒紊浓度／％ 0 lO 20 30 40 50 辽梗244 相对诱导率／％ 100 96．61 65．95 3756 29．10 20．33 秋 光 相对诱导率／％ 100 89．49 74．8(i 6963 66．79 62．93 沈农129 相对诱导率／％ 100 88．66 75．75 7422 68．11 53．29 沈农6H 相对诱导率／％ 1呻 77．80 5106 3057 23．26 2139 从诱导出的愈伤组织看，在粗毒素浓度较低时(10％--20％)，不仅诱导率较高．且愈伤组 织的质量和0处理的差异不大。随着粗毒素浓度的提高，诱导率下降，诱导出的愈伤组织也变 小、变硬，颜色变黄。这种变化大致以粗毒素浓度30％为界限，不同品种在这