AdhIL24对H22肝癌荷瘤小鼠的抑瘤作用及免疫功能影响研究.pdfVIP

童q童一 ●15it◆●干蠢●t-Itll嚣●毫—卜翟 2湘6置l‘触● Ad．hii_,-24对H22肝癌荷瘤小鼠的抑瘤作用及免疫功能影响研究 汪小华叶震教盛伟华谢宇锋王仝志扬吉成’ 【摘要l 目的研究ML-24基因腺病毒表迭载体对H22肝癌荷瘤小鼠的押瘸作用度其对免疫功 能的影响．方法将本室构建的Ad埘L24转染QBI-293A细胞，多轮卷染后获得高效价的病毒． 停药两天后，再连续注射5d．两用后，称体重．眼眶取血。处死后取瘤体，脾脏、胸腺，栓铡抑 瘤率，胸腺指教、脾脏指数、白细胞总教，淋巴细胞百分数，中性粒细胞百分数．结果Ad．hII．24 组与5-Fu组的抑瘤率分别为45．34％和52．11％(PO，05)．两组与NS对照组比较有显著性差异： Ad-ML-24与NS对照纽和正常耒致瘤组相比，胸腺指数变化无统计学意义(P0．05X与5-Fu阳性 对照组相比，胸腺指数增加里著《P0．们)．Ad-hlL-24的脾脏指数高于正常耒致瘤组及5．Fu组 显下降(P0．01)，对中性粒细胞和淋巴细胞所占白细胞总数的百分比也有一定影响．鲒论 Ad-hIL-24可以抑制小鼠1422肝癌的生长，并对机体免疫功能无押帝I作用，为进一步研究其抗肿瘤 作用及机理打下一定的基础． 【关键词lAd-h玎-24；鼠型肝癌；抑瘤；免疫功能 白细胞介素24(IL-24)作为基因治疗肿瘤的新成员，通过多途径发挥抑瘤作用．如调节免 疫功能、抑制肿瘤细胞生长和血管形成、诱导凋亡等，对多种培养的肿瘤细胞具有抑癌效应u1．而 且对正常细胞无毒性反应ol削．腺病毒(AdV)载体能组装较大基因．不会发生随机整合脚。是耳 前比较理想的载体。应用腺病毒介导自细胞介素-24(Ad-hlL24)治疗肝癌的研究国外报道不多， 国内也未见报道，本研究旨在为探索Ad-hIL-24对H22肝癌荷瘤小鼠的抑瘤和对其免疫功能的影响， 为进一步研究其抑制人肝脏肿瘤作用打下一定的基础。 l材料与方法 。 1．1材料 组、包装后构建而成阿门，Qm-293细胞为复旦大学钟江教授惠赠．H22肝癌细胞购自上海细胞所， BALB／c小鼠由苏州大学医学院实验动物中心提供。血样品由解放军100医院检验科检测． 1．2方法 集细胞悬液，2000r／rain离心5rain，细胞沉淀用无菌NS挽涤2-3次后。将细胞悬液反复冻溶3次． 2000rlmin离心5min，取上清，可获得高滴度重组病毒子于．80℃保存。 1．2,2病毒效价的测定：生长良好的QBI-293A细胞经胰酶消化后计数，稀释细胞浓度为105个，ml， 然后以100ul／孔接种于96孔板上。培养24h后。收获的重组病毒子再按l矿、104、l矿、104稀 释，每个稀释度按每孔100ul接种，培养Igh后，荧光显微镜下，进行荧光计数，按公式t病毒效 价Ofu／m1)气荧光数xloy相应稀释度。 1．2．3 H22荷瘤小鼠模型建立；先给2只BALB／c小鼠腹腔内注射鼠腹水型H22肝癌细胞，腹水形 ’基金顷日：苏州太学医学发展基仝贵助(EEl34517k通讯作者：扬吉威《194玉)，苏，竹大学医擘院细胞与分干生转 学教研生； E-mail：—icvar垃@．su—da．cdu．cll；研究方向：分子克燕学；安徽秉瑚人 125 贵州t一 ●15^4HI干托t曩-t●子t术套翟 2006．8．17-20 H22 成后抽取腹水，稀释5倍后．再给12只雄性BALB／c小鼠(259左右)于右腋皮下注射2x106 细胞数．200uVY{．7d后肿瘤长至直径约0．6m分组治疗。另设4只正常未致瘤对照组。 射5d．两周后．称体重．眼眶取血．处死后取瘤体、脾脏、胸腺．计算出抑瘤率、免疫器官指数， 血常规测白细胞总数，淋巴细胞数和嗜中性粒细胞数占白细胞总数的百分比，用于对比研究． 抑瘤率(％)；【(NS组平均瘤重一治疗组平均癌重)／NS组平均瘤重1×100％ 器官指数t免疫器官重(gy小鼠体重(曲x1000 1．2．5统计学分析：用SPSSll．0统计学软件包对所获数据进行独立样本T二检验。 2结果 2．1重组病毒子的获得