青蒿体细胞胚胎发生的研究.pdfVIP

青篙体细胞胚胎发生的研究 欧阳杰 王晓东 赵 兵 王玉春 (中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室，北京 100080) 摘要 研究了青茜在培养过租中愈伤蛆织的诱导和体细胞胚胎的发生。主要结果如下:[)1.MS十6- BA(1.0mg/L)是诱导愈伤AlV,的适宜培养墓;)MS+2,4一D(0.5mg/L)是体细胞胚胎发生的追宜 培养基;③通过MS十GA3(10mg/L)悬浮培养可大I产生体胚，然后经固体分化培养基产生成熟体 胚;④固体培养时体细胞胚起派于愈伤组织的表皮或表皮下的单个启动细施，然后分裂成体翻胞胚。 关.词 青茜 愈伤组织 体细胞胚胎 1 前盲 青x素 (artemisinin)是植物类异戊二烯次生代谢途径所形成的倍半裕衍生物，对治疗疟疾 特别是对脑型疟疾和抗抓哇疟疾具有速效和低毒的特点，已成为一种广泛使用的抗疟特效 药M〔。通过转基因技术可以显著提高青蓄毛状根中青蔺素的含量，但同时也面临着缺乏青禽优 质种苗的问题。而通过体细胞胚培养，建立体外筛选和繁殖体系，可以为优良品种的选育和脱 毒苗系的繁殖提供一条捷径。 体细胞胚胎是由抱子体或配子体的细胞通过无性繁殖产生的一种类似于合子胚的结构，从 1958年Reinert在胡萝 卜的组织培养中最先发现体细胞胚胎以来[[31，已经从人参、石刁柏、川芍、 水稻和玉米等植物通过离体培养产生体细胞胚，至今可以产生体细胞胚的植物约有43科，92 属，100种以上[[al。本文研究了青蓄愈伤组织的诱导和体细胞胚胎的发生，观察了体细胞胚胎发 生的早期过程，并在液体培养下获得大量体胚，为进一步进行遗传转化和人工种子方面的深人 研究提供参考。 2 材料和方法 2.1 材料 青禽 (ArtemisiaannaaL.)毛状根为Ri1601质粒诱导采自四川酉阳的青蓄叶片产生的毛状 根。 2.2 愈伤组织的诱导和体细胞胚发生的培养方法 取青篙毛状根，剪成5mm长，接种在添加激素的ms固体培养基 (加396蔗糖)上，于亮处 和暗处培养，诱导愈伤组织。将诱导出的愈伤组织转接于相同培养基上继代一次，继代时间为 15d。挑选绿色的愈伤组织接种于体胚发生培养基中培养以诱导体胚发生。培养室温度为25士 1cI，各固体培养基均用。.68%琼脂粉固化，121℃灭菌20min，灭菌前调pH至5.85一5.90。光 照强度24umoVm2s，光照时间16h/do 2.3 液体悬浮培养 挑选生长旺盛的体细胞胚接种于液体培养基中悬浮培养，摇床转速110一120r/min。补加10 m8/L的GA3，促进体细胞胚的成熟和萌发。每7一10天继代一次，共继代5次。实验在装有 50mL培养基的150mL三角瓶中进行。 2.4 体胚成熟的培养方法 将悬浮培养的体细胞胚用无菌水洗净后，转接到固体分化培养基上，分别于暗处和亮处培 养。亮处光照强度为18umol/扩。，光照时间16h/d,培养温度25:tVC. 3 结果和讨论 3.1 不同激素对愈伤组织形成的影响 613 将已剪短的青高毛状根接种到分别添加lmg/L2,4一D,6一BA,KT,NAA的MS固体培养 基上培养，进行愈伤组织的诱导，其结果见表to 在含tmg/L6一BA的MS培养基上，18d 衰1在含不同徽t的NB培养若上愈伤组织的诱导悄况 时开始分化出愈伤组织，25d左右有大量 Table1TheinductionofCRIBinNIS 的愈伤组织诱导形成，诱导率为100%. mediawithdifferentplantregulators _ 其中在亮处诱导的愈伤组织颜色为黄褐 培养基 愈伤组织诱导情况 Media InductionofCelli 色，结构疏松，颗粒较小;而在暗处诱 ~ . 一 一 一 一 一