蓝狐卵母细胞OPS法冷冻保存技术的研究.pdfVIP

中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十三属学术研讨会论文集 蓝狐卵母细胞oPS法冷冻保存技术的研究 刘国世3马承宝’周光斌’张洪海2贾丽玲’朱士恩协 (1．中疆农业大学动物科技学院，就京100094；2．髓阜繇范大学生物系，腩阜273165) 捅要本试验以势母细胞解冻摩形态正常率争成熟率为指标，筛选有效酶阅情期蓝狐卵母细胞OPS 关键词蓝狐，卵母细胞，玻璃化冷冻 近20多年来，入们对各种哺乳动物卵母细胞冷冻保存进行广泛研究，取得一定进展。小鼠 el elaI．，1991141；O’Neil甜aL， (Whittingham,1977【1]；Glenistera1．，1987t2J；Nakagata,1989t31；Kono et et a1．，1989t61；Vmcen etal。。 2000tSl)、兔(At．Hasani et et et 1998t9]；．Vieiraa1．，2002[1弼)和入(Chen，1986t111：Vana1．，1987t1刁；Michael et a／．，2005[14])[錾j舞母细胞冷冻一解冻爱经锩外受精得到盼胚胎移植骺生下了藤代，丽盈牛冷冻一解冻 et 卵母细胞作核移植受体获得了克隆后代(Houal，．2005tlal)，但是卵母细胞冷冻保存研究水平远远不 及胚胎。细胞骨架、纺锤体以及皮质颗粒对抗冻保护剂和低温非常敏感，影响卵母细胞冷冻后的存 el el 活率和发育潜力(Leibo，1980t16]；Schalkoffa1．，1990t1；Erogluet蔬，1998[强]；ShawaL， et Claudia 2000t19l；Chenal。，2003f201ietaL，2004t21’)。磁有关狐狸及其他犬科动物卵母细胞冷冻的硪究 尚无报道。 期，11月前后取皮的间情期蓝狐卵巢上的卵泡还没有完全发育。本试验用改进№江的OPS法，以 解冻形态正常率及成熟率为判定指标，研究不同玻璃化液、不同培养时间及冷冻平衡时间对间情期 卵霹细胞冷看成熟率的影响，旨在探索有效的蓝狐卵母细胞玻璃化冷冻方法，并为犬科动物卵母细 胞冷冻保存研究提供参考。 1材料与方法 1．1试验材料 1。1．1 0PS的制备 管壤厚度约为0．025mm。待冷却后用手术刀片在其细端切开，细端长度为2．5cm左右。 1。1。2溶液懿制 30％(w／v)聚蔗糖(Ficoll Mannbeim)， 基金项目：山东省教育厅重点基金(J03H01) 作者：剃溪蓬，博士，副教授，矫究方蠢：艇胎垒物技术，．gshliu@cau．exiu．cn一 事联系入O／FAX)，—zhushien@—cau．edu．cn 331 串匿誊牧筹医学会动物繁殖学分会第十三鼷学零研讨会论文集 —量曼黑舞曼曼曼黑篁蔓曼量鼍墨皇曼曼, Ill I———I—一—— I皇量曼舅黑曼曼曼曼黑皇曼曼曼冀邕曼曼曼曼麓皇曼曼舅意蔓_ 经mPBS溶解后制成FS溶液。预处理液和玻璃化液的配制见表1-1。 表1 各种预处理液和玻璃化液组成(v／v) Table solutionsandvitrification 1．Compositionofprctreafing solutionsused(v／v) sulfoxidc BG：ethyleneglycol；DMSO：dimcthyl 1．1。3阉情期蓝狐卵母细胞的收集 链霉素0。19／L)的保温瓶中带回实验室。先用加有抗生素37D生