基于途径分析的L谷氨酸发酵条件优化研究.pdfVIP

l|蚕耄囊蚕篓；氧羔j基≯酸譬篙：薹嚣銎蚕 基于途径分析的L一谷氨酸 发酵条件优化 杜军 刘辉 徐庆阳 陈宁 天津科技大学生物工程学院 中科院过程工程研究所 【摘要】应用途径分析方法分析了黄色短杆菌GDK-9由葡萄糖发酵生产L一谷氨酸的途径，确定了 L一谷氨酸合成的最佳途径和最大理论产率。通过比较途径分析所获得的反应模型，确定了a一酮戊二酸和 柠檬酸是L一谷氨酸合成途径的关键节点。在此基础上改变外界环境因子，强化L一谷氨酸生物合成途径中 关键节点柠檬酸的代谢流，减少副产物乳酸的生成，以提高L一谷氨酸产率。实验采用脉冲流加补料方式， 控制溶氧浓度在10％左右， 生物素亚适量法生产L一谷氨酸产量达到1369／L。 【关键词】L一谷氨酸；途径分析；黄色短杆菌 acid)是蛋白质的主要构意义。实际上细胞内代谢网络可以由途径分析获得 L一谷氨酸(L-glutamic 成成分。在医药、食品、人造制革、化妆品工业及 的基本反应模型的非负线性组合产生的。在这些基 农业上具有广泛的用途。目前国内发酵法生产L 本反应模型中有一个代表最高的产率和代谢流分 谷氨酸的产酸水平和糖酸转化率与国际同行业尚 布的理想载流途径。理想载流途径的构建开始于酶 有较大差距。针对氨基酸行业发酵生产现状，采用 的确定、理论产率的计算和确定最优的代谢流分 代谢工程等方法，优化产业生产菌种和发酵工艺， 布，因此途径分析对于谷氨酸合成理想载流途径的 使得菌种发酵的综合技术水平达到或超过国际先 构建具有重要意义。 进水平，对提高我国氨基酸产业的自主创新能力， 基元模型分析是途径分析的重要工具之一。目 提高国际竞争力具有十分重要的现实意义。 前已有许多基元模型分析成功应用的实例，如酿酒 酵母合成聚．p一羟丁酸，大肠杆菌合成芳香族氨基酸 途径分析(pathwayanalysis)是代谢工程中用 以指导遗传操作的理论基础，是代谢网络分析的重 等。本文应用基元模型分析确定了最大理论产率模 要方法之一。途径分析研究对于指导谷氨酸棒杆菌 型，找到目的产物合成的最优途径等。并以此为依 发酵生产谷氨酸的菌种选育及过程控制具有重要 据为高产L广谷氨酸的基因工程菌的构建和发酵过 ·124· 2007年全国发酵行业高峰论坛 程优化提供理论指导。 2、结果与讨论 1、材料与方法 2．I谷氨酸生物合成途径分析 1．1供试菌株 根据相关参考文献，本文途径分析模型的建立 黄色短杆菌(Brevibacteriumflavum)GKD．9，基于如下假设： 天津科技大学代谢控制研究室保藏菌种。 (I)由于菌体生长中代谢网络复杂，同时考 1．2培养基 虑葡萄糖到L广谷氨酸的完全转化，所以本文将不考 1．3培养方法 虑谷氨酸棒杆菌细胞的生长代谢。 h。 1．3．1斜面活化培养：32℃培养20--24 (2)按照固定比例进行的反应以及无分支点 1．3．2种子培养：500mL三角瓶装液量20m的中间反应，可简化为一个反应过程。 L，9层纱布封口，于旋转式摇床上(200r／min)，(3)途径分析不能区别同工酶，所以它们都 32℃振荡培养8～10h。 被认为是同一个反应步骤。 1．3．3 10L自控发酵罐分批发酵：10L发酵