钙离子浓度对小鼠2细胞电融合制作四倍体囊胚效率的影响.pdfVIP

巾国喜牧穆医学会动物繁殖学分会第十兰属学术研讨会论文集 钙离子浓度对小鼠2一细胞电融合制作四倍体囊胚效率的影响 王芬1刘国世件朱士恩1朱捷2张忠诚1 (1．率莺农业大学动物科技学院，j艺京，1000942．英嚣诺丁汉大学，诺丁汉， ) 摘要 为筛选电融合液最佳钙离子浓度及电场强度，提高电融合后小鼠四倍体囊胚率和囊胚细胞 数，本实验对2一细胞胚胎采用电融合法进行小鼠四倍体胚胎制作，研究了九种不同钙离子浓度(O．05， 融合效果的影响，并对钙离子浓度王．0mmoI／L条件下的电融合场强(500-3000V／cm进行了筛选。 实验结果表明，场强1000V／cm，脉冲时程30“S，单电脉冲条件下，丸种不同钙离子浓度电融合液 融合率分别为：50．00±14．14％、66．67±5．77％、66．97士25．58％、62．48±16．39％、64．77± 1。Ommol／L的融合液融合率最高，与钙离子浓度为0。05rmol／L的融合率差异极显著(P0．01)，与 土15．39％，28．79±16．37％、25．91±l 差异显著，但与对照组差异不显著。钙离子浓度为l。Ommol／L，脉冲时程301．ts，单电脉冲条件下， 电场强度力800V／cm融合率最高为86。67％，与500 时囊胚率最高为47．22％，但与800V／cm差异不显著。由此说明，融合液的钙离子浓度对胚胎融合及英 后期发育的都有影响。 关键词小鼠；2一细胞期胚胎；电融合；钙离子浓度；四倍体 染色体倍性操作是植物和水生动物细胞工程育种磅究中一个行之有效的途径，皇 Swarup(1956)¨1首次用低温诱导三棘刺鱼(Gasterosteusacu]eatus)获得三倍体以来，至今已有20 余种鱼类多倍体和lQ多种贝类多倍体育种成功涮。蔼哺乳动物的四倍体(4n)在自然界中蹿前还只是 ～种染色体畸型，其自然发生率非常低。Snow糟~51使籍松胞素8诱导，获得四倍体小鼠，但其后无人 4n胚胎可以着床，部分可发育到体节麓抟^哇，但胎儿一般为畸型，但无发育到出生。磊前，四倍体 胚胎的制备已经成为哺乳动物发育生物学的有力工具，例如，疆倍体互补生产嵌合体的过程中的缨 脆倾向性的分布特点H2~垮1，在研究胚胎发育调控机理，建立基因缺陷动物模型和动物克隆上有着特 殊的应用价值。通过四倍体胚胎补偿法制备完全由Es缁胞发育而来的小鼠Hp玎’，为研究人类基因功 能和构建疾病动物模型提供了一条有效途径。 水癌细胞融合，并首次表明紫外灭活的仙台病毒可以诱导体外细胞融合形成多核体。1962年Cocking H鄹首次用纤维素酶处理番茄果实的组织和根尖细胞，得到原生质体。60年代末期，第一例原生质体 培养得到再生植株。1972年，美国科学家卡尔逊首次用硝酸钠作融合诱导剂，使两种不同的烟草原 基金项目：北京市自然科学基金资助项目(5063044) 木联系人； 刘因世Tel：010Email．gshliu@cau．edu．cn． 作者简介：正芬(1983一)，女。2005级硕士研究生，研究方向：动物胚胎生物技术． 192 中豳畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十纛届学术研讨会论文集 1111 1, IIIIII ．．． ．．．．．1llllI嬲 Luk发现高效融合剂—— 硝，高Ca(pH=lO．5，0．05MCaClD是一种新的融合诱导剂。1974年，弑ichal 一聚乙二醇(PEG)，使不同科属原生质体之间都可以融合，融合率可达30％以上。1978年， 小鼠四倍体胚胎最常用的方法是电融合法。这种方法简便而高效，具有很好的重复性和可操作性， 且融合后的胚胎能在体外继续发育。 本实验采用电融合法进行小鼠醒倍体胚胎制佟，硬究九种不霹钙离子浓度(O。05，0。王，0。2，0。4， 育率的影响，并对钙离子浓度1．0mol／L条件下的电融合场强进行了筛选，以确定电融合法制作小 鼠四倍体胚胎的最佳条件。 1 材料与方法 薹．重材料 1．1．1实验动物57周龄昆明白系小鼠(体重20～259)由中国科学院遗传所实验动物中心提供， 自由采食饮水，控光(光照14hr／d，6：0020：00)。 1．1。2孕马盘清健性豫