HPLC谱图异常问题与原因及解决方法.doc

HPLC谱图异常问题与原因及解决方法液相色谱系统的许多问题都能在谱图上反映出来。其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决；而其他的问题必须通过修改操作程序来解决对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键。峰拖尾解决方法1、筛板阻塞a、反冲色谱柱 ?b、更换进口筛板 ? c、更换色谱柱2、色谱柱塌陷色谱柱3、干扰峰a、使用更长的色谱柱 ? b、改变流动相或更换色谱柱4、流动相调整a、加入30ml的三乙胺（用于碱性化合物）或醋酸胺（用于酸性化合物）， 未知化合物加醋酸三乙胺； b、如仍然拖尾，将三乙胺换为二甲基辛胺（或醋酸二甲基辛胺）；5、样品与填料表面的点发生反应 a、加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂 ?b、更色谱柱 降低进样量。 与HPLC系统有关的峰拖尾和峰加宽 a、进样体积过大，（通常≤25μL）； b、进样阀与色谱柱及检测器之间的管路体积过大 c、检测器流通池的体积过大。A、b、c、 b、峰前延原 因解决方法、样品溶剂选择不恰当使用流动相作为样品溶剂、样品过载降低样品含量色谱柱损坏见1、2 4、出峰时间太早 色谱柱没有保留，物质自然扩散，增加物质在色谱柱上的保留 5、柱温低 允许范围内升高柱温 6、干扰峰a、使用更长的色谱柱 ? b、改变流动相峰分叉原 因解决方法1、保护柱或分析柱污染a、取下保护柱再进行分析如果必要更换保护柱如果分析柱阻塞，拆下来清洗如果问题仍然存在，可能是柱子被强保留物质污染，运用适当的再生措施如果问题仍然存在，入口可能被阻塞，更换筛板或更换色谱柱。2、样品溶剂不溶于流动相改变样品溶剂如果可能采取流动相作为样品溶剂。保护柱填料与分析柱填料不一致a、使用更长的色谱柱 ? b、改变流动相 d、峰变形原 因?解决方法1、样品过载减少样品载量早出的峰变形原 因解决方法1、样品溶剂选择不恰当a、减少进样体积 ? b、运用低极性样品溶剂早出的峰拖尾程度大于晚出的峰原 因解决方法1、柱外效应a、调整系统连接（使用更短、内径更小的管路） ? b、使用小体积的流通池g、K’增加时，脱尾更严重 原 因解决方法1、二级保留效应，反相模式a、加入三乙胺（或碱性样品） ? b、加入乙酸（或酸性样品） ? c、加入盐或缓冲剂（或离子化样品） ? d、更换一支柱子2、二级保留效应，正相模式a、加入三乙胺（或碱性样品） ?b、加入乙酸（或酸性样品） ?c、加入水（或多官能团化合物） ? d、更换一支柱子h、酸性或碱性化合物的峰拖尾 原 因解决方法1、缓冲不合适a、使用浓度50-100mM的缓冲液 ?b、使用Pka等于流动相PH值的缓冲液i、额外的峰原 因解决方法1、样品中有其他组份正常2、前一次进样的洗脱峰a、增加运行时间或梯度斜率 ?b、提高流速3、空位或鬼峰a、检查流动相是否纯净 ? b、使用流动相作为样品溶剂 ? c、减少进样体积样品过滤器带来污染 将过滤器浸泡在样品溶剂中并进样试验改变过滤器类型采用交替清洗技术。 j、保留时间原 因 ?解决方法1、温控不当调好柱温2、流动相组分变化防止变化（蒸发、反应等）3、色谱柱没有平衡在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱、泵中有气泡从泵中除去气泡、流速变化重新设定流速 流动相选择不恰当a、更换合适的流动相 ? b、选择混合流动相 l、基线漂移 原 因解决方法1、柱温波动。（即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。）控制好柱子和流动相的温度  2、流动相不均匀。（流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。）使用HPLC级的溶剂，高纯度的盐和添加剂。流动相在使用前进行脱气，使用中用。 3、流通池被污染或有气体用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。可以用硝酸。（不要用盐酸） 4、检测器出口阻塞。（高压造成流通池窗口破裂，产生噪音基线）取出阻塞物或更换管子。参考检测器手册更换流通池窗。5、流动相配比不当或流速变化 更改配比或流速。为避免这个问题可定期检查流动相组成及流速。 6、柱平衡慢，特别是流动相发生变化时 用中等强度的溶剂进行冲洗，更改流动相时，在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗。 7、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成 检查流动相的组成。使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂 8、样品中有强保留的物质（高K’值）以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的基线。 使用保护柱，如有必要，在进样之间或在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子。 m、基线噪音（规则的） 原 因解决方法1、在流动相、检测器或泵中有空气流动相脱气。冲洗系统以除去检测器或泵中的空气2、漏液检查管路接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要，更换泵密封。3、流动相混合不完全用手摇动使混合均匀