GAL4UAS系统在果蝇Tis11基因RNA干扰中的应用.pdfVIP

GAL4/UAS系统在果蝇Tis11基因RNA干扰中 的应用 刘 勇 张梅超 韦有恒 马维骏 上海交通大学医学院/中国科学院上海生命科学研究院 健康科学研究所，中国上海200025 摘要：TTP在哺乳动物许多关键基因表达的转录后水平上起调控作用，Tis11是TTP蛋白在果蝇中的同源物. 目前还没有现成的可用于研究Tis11功能的基因敲除或敲低的果蝇.为了获得肌动蛋白启动子或者热激蛋白 启动子驱动表达Tis11 mRNA干扰序列的具有较高干扰效率的Tis11基因干扰果蝇,将肌动蛋白启动子或者 热激启动子驱动表达的GALA果蝇品系与融合有Tis11 mRNA干扰序列的UAS品系杂交，收集同时带有 GALA基因和UAS序列的子一代果蝇.提取所收集果蝇的总RNA，将其中的mRNA逆转录成cDNA,并设计检 测Tis11基因的特异性引物，然后通过Real-time PCR检测Tis11 mRNA的表达情况.结果显示所收集的能表 达Tis11基因干扰序列的子一代果蝇与不能表达Tis11基因干扰序列的对照果蝇相比，其体内Tis11 mRNA的 表达水平下降明显.收集的果蝇其体内所表达的干扰序列对Tis11 mRNA干扰效果显著,我们成功获得了 Tis11基因的RNA干扰果蝇. Tis11;GAL4/UAS系统;RNA干扰;果蝇 Q812 A 1007-7847(2012)03-0207-05 The Application of the GAL4/UAS System in the Drosophila Tis11 RNA Interference LIU YongZHANG Mei-chaoWEI You-hengMA Wei-jun 2012-03-26 2012-04-18 国家自然科学基金资助项目 作者简介：刘勇（1984-），男，湖南长沙人，硕士研究生，主要从事果蝇天然免疫的转录后调控机制的研究；*通讯作者：马维骏(1963-), 男，江苏南京人，中国科学院上海生命科学研究院健康科学研究所研究员，博士，主要从事基因表达的转录后调控机制的研究,Tel: 021- E-mail: wj-ma@sibs.ac.cn. 代果蝇的cDNA加去离子 者之间没有显 系：来自GD库的122. @@[1] GILLIS P, MALTER J S. The adenosine-uridine hinding factor recognizes the AU-rieh elements of cytokine, lymphokine, and oncogene mRNAs[J]. The Journal of Biological Chemistry, 1991, 266(5): 3172-3177. @@[2] BLACKSHEAR P J. Tristetraprolin and other CCCH tandem zinc-finger proteins in the regulation of mRNA turnover[J]. Biochemical Society Transactions, 2002, 30(6): 945-952. @@[3] MA Q, WADLEIGH D, CHI T, et al. The Drosophila TIS11 homologue encodes a developmentally controlled gene[J]. Onco gene, 1994, 9(11): 3329-3334. @@[4] WEI Y H, XIAO Q H, ZHANG T, et al. Differential regulation of mRNA stability controls the transient expression of genes encoding Drosophila antimicrobial peptide with