人IGF-I基因慢病毒介导RNA干扰有效靶点的设计及筛选.pdfVIP

ChinJCritCareMed May20l2 Voh.32 o.5 42 l 20l2 5 32 5 N 中国急救医学 年 月第 卷第 期 论 著 GF-I NA I R 人 基 因慢病毒介导 干扰有效靶点的 设计及筛选 ! ! ! ! ! ! 刘红升 赵晓东 苏 琴 党 伟 果应菲 袁晓玲 如咪 明 o.30l25020 N 基金项 目 国家杰 出青年基金项 目 作 l00048 北 者单位 京 解放军总医院第一附属医院急救部 l97l- 作者简介 刘红升 女 博士 主治医师 l963 - 男 急 E-maih zxd637l5@ 通讯作者 赵晓东 救部主任 主任医师 I R I ! 要 目的 设计并筛选人 GF-I 效 NA 扰片段 构建 GF-I-siRNA 表达 摘 有 干 慢病毒 I 4 l p 载体 方法 对人 GF-I 因编码 区分析 筛选序列 条 阴性对 照序列 条 与 GCL-GFP 基 大肠杆菌感受态细胞 阳性克隆经过鉴定后得到正确重组子 制备编码慢病毒 质粒重组后 转染 颗粒 的重组病毒质粒及其 两 种 辅助包 装 原 件 载体 质粒 共 转染 293T细胞 体外 直 接感染 表达 I R GF-I 人血管平滑肌细胞 通过用 eahtime-PCR 验干扰效果 结果 !成功地合成 四条 的 检 s D P 编码发夹 iRNA 单链 NA pGCSIL-GFP 中 构建重组质粒 scSI-l 序列 的 并将其克隆到 载体 P R 2 3 4 基因的重组质粒 scNC 切鉴定和测序证实载体构建成功 eahtime-PCR 及无关 酶 检测