其他病原微生物分离及鉴定.ppt.pptVIP

一、螺旋体 （Spirochaeta） 螺旋体是一类菌体细长、柔软、弯曲呈螺旋状、能活泼运动的原核单细胞微生物。它的基本结构与细菌类似，有细胞壁、核质，以二分裂繁殖，广义上属于细菌。 抵抗力－极弱。对温度和干燥特别敏感。 对常用化学消毒剂亦敏感，1%~2%石炭酸内数分钟就死亡。 对青霉素、四环素、红霉素或砷剂均敏感。 （一）主要生物学特性 1.形态：螺旋状 ，有些可通过细菌滤器或滤膜。 2.结构：原生质柱 、轴鞭毛 、外鞘。 3.运动性：运动活跃。 4.繁殖方式：以二分裂法繁殖。 5.核酸：核酸兼有RNA和DNA。 6.染色：革兰氏阴性，但大多数不易着色。 7.培养特性：多数需厌氧培养，营养要求较高， 有些不能用人工培养基培养。 二、致病性与免疫性 二、致病性与免疫性 二、致病性与免疫性 致病物质---类似细菌内毒素与外毒素 1．内毒素样物质(ELS)或称脂多糖样物质(LLS) 2．溶血素 3．细胞毒性因子(CTF) 4.细胞致病作用(CPE)物质 所致疾病 钩端螺旋体病------一种人畜共患传染病 传染源：鼠和猪 传播途径：经粘膜或破损皮肤进入; 经胎盘垂直传播 临床表现：先形成钩体血症；进入损伤全身毛细血管内皮细胞，及肝、肾、肺心及中枢神经，可出现休克、DIC、黄疸、出血、心肾功能不全、脑膜炎等。 疾病特点：起病急、高热、乏力、全身酸痛、眼结膜充血、腓肠肌压痛、表浅淋巴结肿大。 免疫性 疾病后可获得抗同型钩体的持久免疫力。 （三）、分离培养 螺旋体能够在人工培养基上生长，但需用液体或半固体培养基。最常用的培养基有柯氏培养基和捷氏培养基。 接种材料为血、尿及组织乳剂。 一般培养时间10-30d,确认无钩端螺旋体生长者可弃去而判为阴性。 （四）、动物感染实验 采用幼龄豚鼠（体重150-200g）或仓鼠，腹腔注射被检样1-3mL。接种后每日测温观察两次。 （五）、血清学试验 一般采用已知抗原检查动物血清中的抗体。 凝集溶解试验具有高度的型特异性，是诊断本病最常用的方法。 凝集反应（agglutination test） 一种血清学反应。颗粒性抗原（完整的病原微生物或红细胞等）与相应抗体结合，在有电介质存在的条件下，经过一定时间，出现肉眼可见的凝集小块。参与凝集反应的抗原称为凝集原，抗体称为凝集素。可分为直接凝集反应和间接凝集反应两类。直接凝集反应 颗粒状抗原（如细菌、红细胞等）与相应抗体直接结合所出现的凝集现象。分为玻片法和试管法。 间按凝集反应 将可溶性抗原（或抗体）先吸附于一种与免疫无关的、一定大小的颗粒状载体的表面，然后与相应抗体（或抗原）作用。在有电介质存在的适宜条件下，即可发生凝集，称为间接凝集反应。 沉淀反应（precipitation） 一种血清学反应。可溶性抗原与相应抗体结合，在有适量电介质存在下，经过一定时间，形成肉眼可见的沉淀物。沉淀反应的抗原可以是多糖、蛋白质、类脂等。 沉淀反应的实验方法大体可分为环状法、絮状法、琼脂扩散法三种基本类型。 二、立克次氏体（Rickettsia） 立克次体是一类介于病毒与细菌之间的原核细胞型微生物，在形态结构和繁殖方式等特性上与细菌相似，而在生长要求上又酷似病毒。此类微生物引起人和动物立克次体病（如Q热、斑疹伤寒、恙虫病等）。为纪念Howard Taylor Ricketts而命名。 （一）、生物学特性  1. 多形性，主要是球杆状。 2.大小介于细菌和病毒之间，多数不能通过细菌滤器。 3.革兰氏阴性，有细胞壁 4.专性细胞内寄生 5.以二分裂方式繁殖 6.对理化因素抵抗力不强， 尤对热敏感 7.主要寄生于节肢动物中， 通过叮咬感染人和动物 （二）、病料的采集与检查 根据所怀疑的疾病或检疫要求，采取立克次氏体含量较多、无杂菌污染或污染较少的适宜材料，并按无菌方法采取。病料应置于-70℃保存及时检查。 根据需要取不同形式材料。 对原始材料进行涂片染色镜检。形态学检测。 （三）、分离培养 立克次氏体的分离方法有动物或鸡胚接种、细胞培养等。 1.动物接种 选用易感性较高的实验动物。一般采用腹腔接种。 2.鸡胚接种 只感染动物的立克次氏体，不能在鸡胚中培养。 3.细胞培养 多用单层细胞培养法。 （四）、立克次氏体的鉴定 1.形态学鉴定 2.血清学鉴定 免疫荧光染色法、补体结合试验以及微量凝集实验。 三、支原体 支原体（mycoplasma）：又称霉形体，为目前发现的最小的最简单的原核生物。支原体细胞中唯一可见的细胞器是核糖体（支原体是原核细胞，原核细胞的细胞器只有核糖体）。 形态与结构 支原体的大小为0.2～0.3um,可通过滤菌器，常给细胞培养工作带来污染的麻