实验四 纸层析.pptVIP

实验六 纸层析鉴定转氨基作用 ; 层析是利用不同物质，不同的理化性 质如吸附力、分子形状、大小、极性、分配系数的不同而建立起来的技术。所有层析系统都有两相组成。既固定相和流动相。固定相既固体物质或是固定于固体物质上的成分。流动相既可以流动的物质 如：水或溶液等。混合物要经过此两相与其作用，最后分离。 ; 本实验以丙氨酸和α-酮戊二酸为底物，加肝匀浆保温后，用纸层析法检查谷氨酸的出现以证明转氨基作用。 ; 纸层析属于分配层析。以滤纸为支持物，滤纸纤维与水亲合力强，吸收20~22 %的水。而且其中6~7 %的水是以氢键形式与纤维素的羟基结合，在一般情况下很难脱去，而滤纸纤维与有机溶剂的亲和力甚弱。所以纸层析是以滤纸纤维结合水作为固定相，以有机溶剂作为流动相。 ; 在用纸层析法分离氨基酸时，由于各种氨基酸在此二相中的分配系数不同，各有一定的迁移率。丙氨酸属于非极性中性氨基酸，易溶于有机溶剂，而谷氨酸属于极性酸性氨基酸，易溶于水，因此在纸层析体系中谷氨酸和丙氨酸相比而言，丙氨酸更易溶于流动相，因此迁移距离远。; 本实验用圆盘滤纸进行水平型层析，层析结束后利用氨基酸与茚三酮共加热，生成蓝紫色化合物的茚三酮法显色，观察色斑，判定结果。; 2、保温：取干燥小试管（或离心管））二支，分别标明测定管与对照管，按下表操作：