生物化学蛋白质(第三章).ppt

在蛋白质溶液中，加入一定量的与水互溶的有机溶剂，由于这些溶剂与水的亲和力强，能够破坏蛋白质的水化层，使蛋白质的溶解度降低而沉淀。 常用的有机溶剂有乙醇、甲醇和丙酮等。为了防止蛋白质在分离过程中发生变性，有机溶剂浓度不能太高(30%-50%)，而且需要在低温条件下进行。 ?有机溶剂沉淀法 蛋白质分子在等电点时，净电荷为零，分子之间的静电排斥力最小，因而容易聚集形成沉淀。 当蛋白质混合物溶液的pH 被调到某一成分的等电点时，则该蛋白质大部或全部将沉淀出来。而那些等电点高于或低于该pH 的蛋白质仍然留在溶液中。 该法适用于在等电点pH稳定的蛋白质。 ?等电点沉淀法 利用蛋白质分子不能透过半透膜，而使它与其它小分子化合物，如无机盐、单糖、双糖、氨基酸、小肽以及表面活性剂等分离。 将待纯化的蛋白质溶液装在用半透膜制成的透析袋内，再将透析袋放入透析液（通常是蒸馏水或缓冲液）中进行透析。 通透动力为半透膜两侧的物质浓度差 常用的半透膜有玻璃纸或高分子合成材料。 ? 透析法 （2）膜分离法 超过滤技术是利用压力或离心力,强行使水和其他小分子溶质通过半透膜,而蛋白质被截留在膜上,以达到浓缩和脱盐的目的。 其中包括有：中空纤维超滤器、圆筒式超滤器板式超滤器。 超滤膜的截止分子量有100万、50万、30万、10万、5万、1万、5千和1千。 ?超过滤法 两种亲水性高分子或一种高分子聚合物与一种盐溶