灰绿曲霉产纤维素酶的研究.pdfVIP

第 49卷 第 3期 厦门大学学报 (自然科学版) Vo1．49 No．3 2010年 5月 JournalofXiamenUniversity (NaturalScience) May 2010 灰 绿 曲霉 产 纤 维 素 酶 的 研 究 陶毅明 ，马素娟 ，邬小兵 ，龙敏南h ，黄建忠。，陈清西 。 (1．厦门大学 生命科学学院，细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室，‘ 2．厦门大学能源研究院，福建 厦门 361005； 3．福建师范大学工业微生物教育部工程研究中心，福建 福州 351008) 摘要：灰绿曲霉(Aspergillusglaucus)发酵液通过硫酸铵盐析、SephadexCrlO0分子筛、DEAESepharoseFastFlow离 子交换柱和PhenylSepharoseFastFlow疏水层析，分离纯化一种外切葡聚糖酶 (CBH)和一种 内切葡聚糖酶 (EG)．通过 SDS和凝胶柱层析法测定分子质量表明：CBH全酶分子质量为 71ku，由两个分子质量为 35ku的同型亚基组 成；EG为单体蛋白，全酶分子质量为 32ku．酶学性质研究表明；CBH催化 pNPC的最适 pH为 6．0，最适温度为 55℃， 酶活在 pH5．O～8．0区间和温度低于 55℃时稳定；EG催化 CMC-Na的最适 pH为 4．0，最适温度为 5O℃，酶活在 pH 3．5～7．5区间和温度低于 65℃时稳定．Na 、K 、Ba抖、Mg抖 以及 NOZ和 S0i一对 CBH和 EG酶活均无影响；Ca2和 Mn2对 CBH有激活作用，Fe2和Mn2对 EG有激活作用，而Z 、C 和 Cu抖对 CBH和EG均有不同程度的抑制效 应．酶动力学分析表明：CBH催化pNPC水解的米 氏常数K 值为 1．4mmol／L(pH6．0，55℃)，EG催化 CMC-Na水解 的米 氏常数K 值为 5．0mg／mL(pH4．0，50℃)． 关键词 ：灰绿曲霉；纤维素酶；外切葡聚糖酶；内切葡聚糖酶；分离纯化；酶学性质 中图分类号 ：Q556．2 文献标识码 ：A 文章编号 ：0438—0479(2010)03．0391—05 纤维素是 自然界 中分布最广 、含量最为丰富的一 1 材料与方法 类多糖．植物体中碳素的一半 以上存在于纤维素中．天 然纤维素是 D一葡萄糖分子以 1，4一糖苷键结合形成 1．1 菌 株 的线形长链分子，约 3000～10000个葡萄糖残基构 灰绿曲霉(Aspergillusglaucus)由实验室 自行筛 成．能够水解天然纤维素的纤维素酶是一个复杂 的多 选得到的能够降解纤维素的曲霉菌株嘲． 酶体系，一般认为纤维素酶有 3种主要组分[1]，即外 1-2 主要试剂 切葡聚糖酶 (CBH，EC3．2．1．91)、内切葡聚糖酶 Sephadex G一100、DEAE SepharoseFastFlow、 (EG，EC3．2．1．4)和 葡萄糖苷酶 (BG，EC3．2．1． PhenylSepharoseFastFlow为 Pharmacia公司产 品； 21)．由于纤维素酶能将环境中的废纸 、木屑和其它纤 对硝基酚纤维二糖苷 (pNPC)为 Sigma产品；其余试 维废料转化为葡萄糖 ，从而发酵为酒精 ，因而 自从 2O 剂均为国产分析纯． 世纪初纤维素酶被发现以来 ，它的研究和应用就受到 1-3 实验方法 了国内外学者的极大关注． 发酵培养基 ：每升液体培养基 中含 (NH )SO 目前 已从细菌、真菌、软体动物和牛 的瘤 胃