葡萄酿酒酵母菌不同菌株的RAPD分析研究.pdfVIP

甍葡酿霭酵母营币同菌株钓RAPD分析 葡萄酿酒酵母菌不同菌株的RAPD分 裴颖芳宋育阳徐艳文刘延琳 (西北农林科技大学葡萄酒学院，陕西杨凌712100) 提要本研究通过已知菌株与未知菌株的RAPD图谱比较，来初步确定它们问的种属关 系。实验中试用了12条随机引物对6株葡萄酿酒酵母茵全基因纽进行随机扩增多态DNA分析， 比较稳定清晰的菌株RAPD指纹图谱。RAPD分析结果表明，葡萄酿酒酵母菌株之间的遗传相似 系数在加．O％．90．9％之间，反映出较高的遗传差异性。结果表明，利用RAPD标记技术在基因水 平上对葡萄酿酒酵母茵株进行分子鉴定和分型是可行的。同时，在此实验中也对RAPD反应条件 进行了优化。 关键词葡萄酒酵母菌酿RAPD多态性PCR扩增 在葡萄酒酿造中，酿酒酵母菌是一种重要的微生物资源，其分类与鉴定是人类利用的基础。传统的酿 酒酵母菌分类与鉴定是一项复杂而细致的工作，需要在形态学和生理学方面做大量的试验。由于酿酒酵母 菌的形态和生理学特点受培养条件的影响很大，得出的鉴定结果往往不够稳定；同时受到环境因素的影响， 某些酵母菌属、种在形态学和生理学方面的差异极不显著，采用传统分类法相当困难…。近年来，分子标 记技术的引入给酵母菌的分类鉴定带来了巨大的推动作用，使分类鉴定工作由一般的表型特征鉴定深化到 分子水平和遗传型特性的鉴定“。 chain 基于聚合酶链式反应(polymerase 到生物体的整个基因组DNA，因而大大简化了技术过程和工作强度，在菌种的鉴定、基因遗传图谱制作、 数量性状基因研究、自然群体中遗传变异及种间杂交的研究、流行病学调查和菌株鉴别上均发挥了重要的 作用【3】。RAPD速度快、成本低在较短时间内可分析大量样本，既省时又省力；RAPD多态性灵敏度高， 可检测到单个碱基的置换；RAPD不需要使用同位素，可减少对工作人员的危害，因而成为近年来取代RFLP 和PCR方法的常用手段【3】。在本研究中，应用已知菌株与未知菌株的RAPD分析，来初步确定它们之间的 种属关系。为以后菌种的进一步分析鉴定做准备。 基金项目：西北农林科技大学青年骨干支持计划 cn 通讯作者：刘延琳，E-maihlylsun@yahoo．com 一儿3一 第五屦国际蔼萄与葡萄酒学术研讨会论文囊 1材料与方法 1．1材料：实验中所用葡萄酿酒酵母菌株(表1) 1．2方法 1．2．1 酵母菌基因组DNA的制备与检测 酵母菌基凼组DNA的制各采用简易制备法l”，DNA纯度和浓度的检测用紫外分光光度计法检测，再用 3min。扩增产物在0．8％的琼脂糖中电泳，紫外灯下观察结果，照相”l。 表1所用葡萄酿酒酵母菌 Table1 The usemakeswine grape yeastfungus 编号CodeNo 菌株s廿ains 属种Genus 来源Sources z Q2243 。主器 盂蠢鬈‰ }“ 宁壹青铜峡农场 ．2 M236 u墨． 耥 3 。。由， “nkn” oili：瓣蕊。。 ‘Pmvi；cc 4 B2006