蛋白质组学技术与药物作用新靶点研究进展研究.pdfVIP

2004年全国生物技术学术研讨舍论文集 研究论文综述 蛋白质组学技术与药物作用斯靶点研究进晨 黄春洪昊梧桐 (中因药科大学生命科学与技术学院，南京210009) 摘要。通过阅读国内外近年来相关的文献资料，进行整理、分析归纳和综合评价，阐述了蛋白质皱 学技术和方法学的最新进展及其在药物作用新靶点发现中的应用．蛋白质组学技术和方法不断成熟，在 药物作用靶点的探测、验证争优化方面起到了重要的作用，提高了药物发现的效率． 关t词l蛋白质组学，新药发现，药物作用靶点，研究进展 药物开发是一个漫长的过程，包括以下步骤：样品制备、新化学实体的发现、靶的探测与验证、 先导物选择、小分子筛选和优化以及临床前、临床试验研究等11J。据统计平均每个新药从研究到上市需 耗时10．12年，耗资近1～1．2亿美元，而I期临床试验通过率仅为8．3％I到。其中药物作用靶点的探测与 验证是新药发现阶段中的重点和难点，成为制约新药开发速度的瓶颈。基因组学研究表明：人体中全部 的发展曾对加快药物开发起很大推动作用，这是因为基因组学技术的灵敏性、高通量性，以及发展了多 种成熟的基因表达分析方法，如基因表达连续分析法(serial analysis ofgene 示(differential array)和cDNA微阵列(cDNAmicroarrays)， display)，寡核苷酸片段芯片(oligonucleotide 并且根据mRNA的序列和加工信息可以推测蛋白质的表达。基因组学在药物研究中的应用日益重要， 从基因水平进行药物发现(drugdiscovery)研究还不够充分，许多疾病的发生和治疗都是在蛋白质水平 作用，疾病的发生也常伴随着蛋白质修饰。而对核酸序列和表达的分析并不能了解蛋白质的修饰情况。 要精确的研究基因的功能和更有效地进行药物开发，还是要回到执行生命功能的蛋白质本身上来。因此， 成为生命科学研究的最大热点，方法和技术都得到明显的改进。并在疾病检测、药物靶点发现、药物代 谢转化、药物毒副作用研究方面显现巨大的应用前景。可以说，蛋白质组学的出现和发展，是生命科学 领域一次真正意义上的“黑格尔式重返嘲’。 l蛋白质组学及其发展 全部蛋白质。蛋白质组学是从整体水平研究蛋白质表达的功能、揭示蛋白质的活动规律，解释基因调节 质谱(mass 有了令人鼓舞的进展，蛋白质组学的技术和方法不断成熟，并朝向自动化、多维化、信息化发展。 1．1蛋白质组学技术的发晨 研究论文综述 2004年全田生物技术学术研讨会论文集 1．1．1多维LC·MS／MS 尽管双向凝胶电泳采用了固相化梯度(immobilized pH 性，并且这种2DE．MS系统的自动化受到了限制。多维色质联用(multidimensional liquid andtandemmass spectrometry， 统是根据蛋白质独特的物理性质：带电性和疏水性来分离多肽混合物。即蛋白质复合物经变性、酶解后， cation 直接加到强阳离子交换柱(strong 能够弥补2DE-MS系统技术和方法上缺陷，如蛋白质在分离过程中的丢失，上样量限制，较窄的分离 范围，偏向性等。该方法能同等地分离高丰度和低丰度蛋白，具自动化程度高、重复性好的特点。Linkllo】 identification MudPIT)， 基础上，发展一种多维蛋白质鉴定技术(multidimensional protein technology， 并成功地分离和鉴定了酵母中的1484个蛋白质，包括