血管抑素在小鼠开窗可视肿瘤模型中的应用研究.pdfVIP

978 血管抑素在小鼠开窗可视肿瘤模型中的应用 范恩学1 孙海侠2 朱桂彬， 王悦增， 1吉林大学第二医院外科长春 130021： 2吉林大学第一医院长春 130021； 3吉林大学基础医学部病理教研室 长春 130021) 摘要：目的：本实验建立小鼠背部可视开窗肿瘤模型，在直视下观察肿瘤生长情况及血管抑素对肿 瘤的影响。方法免疫组化测定血管内皮细胞生长因子、细胞表面磷酸化糖蛋白的表达来了解肿瘤血管生 长的情况，探讨肿瘤血管发生、发展的可能机制。结果：本实验肿瘤细胞移植13天后．对照组所有小鼠移 植肿瘤均生长状态良好，肿瘤的生长巳使小鼠的行动发生困难；而给药组肿瘤小，行动不受限制，也未见 到药物副作用的表现。给药组肿瘤的生长被明显抑制，其肿瘤体积小，重量明显减轻。高剂量给药组与对 给药组肿瘤中发生坏死也比较明显。结论：成功建立开窗可视肿瘤模型，血管抑素可以抑制肿瘤血管新 生。 关键词：血管抑索肿瘤血管新生血管内度细胞生长因子细胞表面磷酸化耱蛋白 肿瘤血管形成在恶性肿瘤发病过程中的作用以及抗肿瘤血管形成对恶性肿瘤的治疗作用的研究引 起了越来越多的学者的兴趣It,21。肿瘤的血管能否产生及形成决定肿瘤的生长和扩散、转移，治疗的关键 是阻止血管形成，使肿瘤饿死及凋亡。本文应用动物模型，在体内试验，且能看得见肿瘤生长情况，利用世 界上最先进基因重组技术生产的血管抑紊(AS)，研究As抑制肿瘤血管可能机制。探究使肿瘤凋亡最有效 办法。 I材料与方法 1．1 动物模型制作及分组 区枫桥净化设备厂和苏州市苏新稀有金属设备厂联合制造)．每天自由喂养生长。于小鼠背部消毒后行无 司生产，抗炎、透明、促进组织生长)。在再I、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组肿瘤局部分别皮下不注人、注入0．1以生理盐水； 察四组生长情况及测量肿瘤体积。 1．2计算体积公式 x V=(耵／6)×dld2×d， l。3 每隔三天杀死每组中的一只。镜下观察血管生长情况。 13天全部处死，切取局部癌组织及肺肝脑组织，10％檑尔马林固定，石腊切片。HE及免疫组化染色。 染色方法省略。 吉林省第三届科学技术学术年会 979 1．4 结果判定及统计学处理 (1)实验动物处死后，马上测量其肿瘤大小及重量。 (2)CD，。染色以细胞浆染成棕黄色为阳性，阳性的血管不以其有无管腔为标准。在200x光镜视野下 计数lO个视野下的血管数。求其平均值(x-i-S)，尽可能多的计数细胞，保证准确性…。 (3)VEOF染色计数根据其染色强度分为阴性：0分；弱阳性：1分；中度阳性：2分；强阳性：3分。根据 色的计数(X±S)。 (4)最后，以上各指标均在计算机上利用统计软件做检验。 2 结果 2．1 药物对肿瘤的抑制作用 肿瘤细胞移植13天后，对照组所有小鼠移植肿瘤均生长状态良好，肿瘤的生长己使小鼠的行动发生 困难；而给药组肿瘤小，行动不受限制，也未见到药物副作用的表现。结果表明：给药组肿瘤的生长被明显 抑制，其肿瘤体积小，重量明显减轻。高剂量给药组与对照组间有显著性差异(P0．01)；而且抑制肿瘤生 长的作用亦明显高于低剂量对照组(P0．01)；高剂量给药组肿瘤中发生坏死也比较睨显。体积：I、Ⅱ与Ⅳ 0．05 2．2 药物对肿瘤问质血管的影响 肿瘤细胞均沿着间质血管排列。而高剂量给药组及低剂量给药组的血管密度极低，并且内皮细胞的形态 不完整，与其它组之间血管密度有统计学差异(P0．01)。 2．3药物对VEGF表达的作用 YEGF蛋白在肿瘤中均有表达。VEGF蛋自在肿瘤中的表达较少，主要表达在内皮细胞中。在对照组 密度关系密切，呈正相关关系。除I与Ⅱ间外，其余各组间P0．01。 3 讨论 本模型在建立的过程中严格执行无菌操作(术中无菌技术、相对无菌环境下饲养、定期空气消毒等)． 背部用生物胶覆盖。动物自由生长，观察大体肿瘤生长情况，每三天测量一次体积、体重和lo倍镜下观 察，四组分别喂养。研究活体状态下肿瘤生长情况，可发现AS对肿瘤生长抑制明显。经免疫组化(CD，：、 kg·d时，抑制肿瘤生