生物大分子分离工程研究.pdfVIP

L036 生物大分子分离工程 孙 彦 （天津大学化工学院生物化工系，天津300072 ） 摘 要 生物大分子包括蛋白质、核酸和病毒等现代生物技术药物。本文简述了生物大分子及其分 离过程的特点和存在问题，提出了分离工程研究的目标，重点评述了近年来膨胀床吸附色谱和流通 色谱的研究进展和应用，展望了生物大分子分离工程研究的发展方向。 引 言 现代生物技术产品的主体是蛋白质药物，包括细胞因子、激素、抗体、酶类、溶血栓药 物等。在功能基因组学和蛋白质组学研究的推动下，蛋白质药物将获得更大发展。近年来， 基因工程疫苗、反义核酸药物和核酸疫苗研究进展迅速，为预防和治疗各种疑难疾病开辟了 新的发展空间。同时，随着 2004 年初第一个基因治疗药物获得生产批文，基因治疗也进入了 新的发展时期。基因治疗药物的主体是目的基因的载体。基因治疗载体包括病毒载体和非病 6 7 毒载体（如质粒DNA ），其相对分子质量（或颗粒尺寸）均远大于蛋白质（分子量 10 ～10 ， 尺寸 30~1000nm ），可称作超大生物分子，其大规模分离纯化为生物分离工程的发展带来了新 的机遇和挑战。 现代生物技术的发展历程表明，生物大分子药物的下游加工过程即分离纯化过程是其生 产过程的制约环节，其成本通常占整个生产过程的 70 ％以上。原因可以归纳为四个方面：（1） 分子量大，分子结构复杂，稳定性低，尤其是质粒 DNA 和病毒等超大分子，分离纯化过程中 容易变性失活，造成收率低下；（2 ）生物大分子的扩散系数仅相当于小分子化合物的 1/10～ 1/1000，传质速率低，分离速度慢，与生物大分子要求快速分离纯化的需求相矛盾；（3 ）目标 产物的浓度和含量低，并且目标产物与其共存杂质间结构相似，分离难度大，需要多步骤分 离过程，这是造成收率低的主要原因；（4 ）分离过程及其产品要求严格的质量控制，进一步 增加了分离纯化的难度。 因此，生物大分子分离工程研究的任务就是应对生物大分子及其分离过程的特点，从多 方面入手建立合理高效的分离过程方案。主要包括以下几个方面：（1）深入理解分离过程机 理，优化分离过程和操作，提高分离过程效率；（2 ）研究开发特异性分子识别配基，建立高 选择性的分离方法，同样可减少分离纯化过程步骤，提高过程收率和产品活性；（3 ）建立和 应用集成化分离技术，减少分离过程步骤，缩短分离操作时间，提高过程收率、产品活性和 生产效率；（4 ）建立和应用快速、大容量和稿分辨率的分离纯化技术；（5 ）研究保持和提高 生物大分子分离过程稳定性的方法。本文结合本课题组的研究工作，重点评述目前生物大分 子的集成化分离技术（膨胀床吸附色谱）和对流强化固相内溶质传质的流通色谱技术。 1．膨胀床吸附色谱 膨胀床是液固相返混程度较低的液固流化床，故膨胀床吸附也称流化床吸附。作为一种 特殊形式的流化床，膨胀床兼有了固定床和流化床的优点，同时又克服了后两者的一些缺陷。 膨胀床与流化床的最大区别是固相介质基本可以悬浮在床内的固定位置，流体流动状态和固 定床相近，以接近平推流的方式流经床层，所以液固两相的轴向混合程度都较低，从而使目 标产物获得良好的吸附效率。同时，由于床层空隙率大，可使菌体细胞或细胞碎片自由通过。 因此，与固定床吸附相比，膨胀床吸附可直接处理菌体发酵液或细胞匀浆液，回收其中的目 标产物，从而节省离心或过滤等预处理过程，提高目标产物收率，降低分离纯化过程成本[1, 2] 。 膨胀床吸附分离技术集料液澄清、 目标产物浓缩和分离纯化于一体，是重要的生物集成分离 技术。另外，膨胀床吸附技术也可与细胞破碎或发酵过程相耦合，提高生物下游加工过程效 率[3-6] 。膨胀床吸附技术的集成化优势是其快速发展主要动力。 Fig. 1 Axial distribution of mean particle size of Fig. 2 Axial distribution of mean particle density Streamline matrix in expanded bed of 6AS matrix in expanded bed 实现稳定、高效的膨胀床吸附操作的最关键因素是具有一定的粒径和（或）密