生物微胶囊固定化酵母培养的研讨.pdfVIP

生物微胶囊固定化酵母培养的研究 ‘ 张惠勇 梅乐和 姚善径.. (浙扛大学化工学院生物化工系杭州 310027) 摘要 进行了NaCS-PDMDAAC生物崔胶t固定化酒精酵毋和产)8假丝酵母的实验研究.考察了这两 种眯毋的培养规律，发现生物橄胶囊固定化酒精醉母的产酒精情况与游离培养基本一致，在连续发酵16批 后，仍具有良好的性能.同时固定化产谷脱甘从(GSH)的产康绍.丝酵母的研究也表明了固定化培养产GSH 童与琳离菌种产全相近. 姜甘询 NaCS-PDMDAAC生物橄胶1 固定化 醉母 乙醉 谷耽甘肤 1引言 生物微胶囊是一种新型的固定化方法，通过将酶、蛋白质、微生物或动植物细胞包埋在一层 由半透膜围成的微囊中，可以使生物大分子或细胞留在胶囊的膜内，而培养基的营养成分和细胞 分泌的小分子物质可以自由出入半透膜，从而达到催化、培养或免疫培养的目的[1-31 纤维素硫酸钠(NaCS)-聚二甲基二丙烯基抓化*(PDMDAAC)生物微胶囊体系出现于80年代 中期P1，在90年代发展很快。该体系的最大特点就是制备方法简单，即将NaCS水溶液液滴直接 滴入PDMDAAC水溶液中，就会形成一种中空的，周围由半透膜包围的胶囊，并且还具有其它一 些优点，如较薄的膜层(20-100wm)、较高的机械强度、良好的生物相容性、适宜的传递和截留性 质以及稳定的物化性质[5,61 包埋在NaCS-PDMDAAC胶囊中的细胞，悬浮在胶囊中间的空间内，每个胶囊就象是一个 微反应器，细胞在按正常方式进行代谢、生长、繁殖以外，还受到了胶囊膜的保护。本文将利用 酵母细胞为模拟体系，考察微胶囊作为生物微反应器在细胞培养时的特点，为扩大微胶囊在细胞 培养中的应用，寻求一般性规律。 2材料和方法 2.1实验材料 2.1.1菌种 酒精酵母由浙江农业大学提供，本研究所保藏。产}m丝酵母(C.utilis)为木研究所保 藏。 2.1.2培养基 酒精酵母:培养基主要组成为(叭)葡萄糖30.0(发酵培养墓为120醉)，尿素31.0, 酵母膏3.0,困H,)ZSO,5.0,MgS047H200.5,K2HP0;3H201.0,KHZPO,1.0, 产阮假丝酵母:培养基主要组成为(P1-)葡萄糖30.0，尿素3.0,(NH,)ZSO,5.0,MgS04.7H200.5, K2HP0,-3H201.0}KHZP0,1.0,酵母膏30.0,pH7.0. 2.1.3微囊化材料 NaCS由本实验室自制，PDMDAAC购自美国Aldrich公旬。 2.2实验方法 ‘国家自然科学基金资助项目(批准号29706009), .’联系人 口..口...口曰旧口. 补 ，.，.尸 ，‘尸 ，，，甲.，，，，，...一 2.2.1醉母培养 酒精酵母的种子试管斜面培养和三角瓶培养:将活化后的酵母菌在无菌条件和30 ℃下培养2-3天，然后接入一环酵母种子于三角烧瓶，放入摇床中，在30℃和200rlmin下培养18h, 产肮假丝酵母的菌体培养:将保存菌种接至摇床培养荃，培养24h. 2.2.2酵母的徽囊化 配制浓度为4.0%的NaCS和2.0%的PDMDAAC溶液，灭菌后待用。在无菌 操作条件下，将一定量的酒精酵母或假丝酵母与NaCS溶液混合，滴入PDMDAAC溶液中，停留约1h, 制成含酵母的微胶囊。然后将固定了酵母的微胶囊故入合成培养基。 2.2.3微班化酒精酵母的半连续培养 将一定量的徽囊化酒精酵母接入200m)发酵培养基中摇床培 养 (30C,200r/min7，定时取样分析，当糖耗尽时，更换培养基，分析培养液中的乙醉含量。如此重复 该过程涟续培养16批。 2.2.4产玩假丝酵母的菌体收集 徽囊化的产阮相to醉母经培养24h后取出微胶囊，经破碎胶囊后 进行离心分离，由沉淀物得假丝酵母菌。用乙醇萃取假丝酵母1h,然后离心，分别收集上清液(含GSH 的乙醇溶液)和沉淀物(酵母细胞)。户上清液可分析GSH的含量. 2.3分析方法 葡萄糖二采用蕙酮法. 采用气相色谱法。 谷胧甘肚:用DTNB[5,5 obis(2-nirto ic-acid即5,5一二硫代二