猪流感福建流行毒株的分离、初步鉴定及潜在的公共卫生学意义研究.pdfVIP

—— 垒亘茎望笪墨堑堕堕型垄堑些墨!!塑 猪流感福建流行毒株的分离、初步鉴定及潜在的公共卫生学意义 v ’ 张德明，魏宏．王隆柏，周伦江，庄向生，陈少莺，刘玉涛 (福建省农业科学院畜牧兽医研究所生物技术实验室，350013福州) 摘要：疑是猪流感病猪的鼻拭子尿囊腔接种lO日龄SPF鸡胚，72H后致死鸡胚；取尿囊液进行血凝试验， 接种物能使多种禽类和哺乳动物红细胞发生凝集；取尿囊液接种鸭胚、鹅胚，48H后致死鸭胚、鹅胚；取 鸽、8周龄仔猪的回归试验，试验发现，该株流感病毒能使信鸽和8周龄仔猪发病：BALB／C小鼠接种病毒 后临床上不表现症状，但体内产生针对该病毒的抗体；说明了该株病毒可能具有潜在的公共卫生学意义。 关键词；猪流感福建分离毒株；分离：鉴定；公共卫生学意义 猪流感是由A型流感病毒引起的猪的急性、传染性呼吸道疾病。其特征为突发，咳嗽，呼吸困难，发 热，衰竭及迅速康复…。猪是禽流感病毒“禽一猪一人”传播链中重要的中问宿主，了解猪流感的疫情动态 将为动物流感及人流感的疾病预测及防制提供重要依据。李海燕”’“…、伍锐‘”、王连想…等从我国上 海、福建、湖jE、黑龙江、吉林、辽宁、安徽、山东、内蒙、河南、河北、江苏、安徽、浙江、湖北、等 我国猪群中H3亚型猪流感的污染相当普遍；同时也从猪群中检测到H9、H5亚型抗体”。。序列分析发现。 国内流行的经典HINI毒株HA基因核苷酸序列与已发表的中国香港、中国大陆、美国及欧洲分离的经典 离的禽流感病毒部分基因高度同源。这说明了国内多种种属动物之间可能发生流感病毒的相互传播。本文 对2002年分离于福建省的猪流感病毒毒株进行鉴定。 1 材料与方法 1．1实验材料 (哈尔滨兽医研究所)；禽流感病毒H5N1和猪流感H3NI阳性血清、鸡新城疫阳性血清由本室保存： 1．1．2细胞、病毒和引物 and respiratorysyndrome 毒VR2332(porcinereproductive virUS，PRV)、猪圆环病毒(Porcine 株(Pseudotabies VR2332株ORF7片段核苷酸序列，设计如下一对引物： 参照NCBI公布的PRRSV 上游引物P1：5’—GcGGATTTATGCTCAATAACAAC--3’ 下游引物P2：5’--AGCTCGCGTCTTGCTGAGGGTGA--3’用以检测PRRSV。 ——一—— △曼苎堂堡銎塑堕塑型壅堑些墨!!塑 参照NCBI公布的PCVII片段核苷酸序列，设计如下一对引物： 上游引物Pl：5’--CTCGGCTATGGGGGCTCCAAAATG--3， 下游引物P2：5’--ACCCCGGGCCCCCGCTACC--3’用以检测PCV。 参照NCBI公布的PRV片段核苷酸序列。设计如下一对引物： 上游引物P1：5’—GACGGATCCCCATGCGGCCCTTTCTGCTGCGCGCC--3’ 1．1．3 实验动物和胚体 本试验所用的BALB／C小鼠由中科院上海实验动物中心提供：信鸽购于农贸 于福州斗门孵化场：鹅、鸭、家兔等其它实验动物购于农贸市场。 1．2 实验方法 1．2．1病料采集、处理及胚体接种试验取高烧期病猪的鼻拭予，以v／vl：5与无菌PBS稀释，加入l PBS；弃 去24H内死亡的鸡胚，隔6H观察并记录鸡胚的死亡情况：取鼻拭子接种后收集的死亡鸡胚尿囊液(以下 称分离物)分装并冻存于一70‘C冰柜；鸭胚、鹅胚接种照此法进行。 1．2．2血凝和血凝抑制试验、猪流感检测抗体ELISA鸡、鸭、鹅、家兔、猪、小鼠等动物的红细胞 按常规方法进行：血凝和血凝抑制试验参考常规方法进行”’…；IELISA方法参考常规方法…】。