猪流行性腹泻病毒N蛋白核仁定位信号对宿主细胞周期的影响研究.pdfVIP

第35卷 第3期 中 国 预 防 兽 医 学 报 Vo1．35．No．3 2013年 3 月 ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicine Mar． 2013 doi：10．3969~．issn．1008—0589．2013．03．01 猪流行性腹泻病毒 N蛋白核仁定位信号对 宿主细胞周期的影响 刘随新 ，石 达 ， 陈建飞 ，张 鑫 ，时洪艳 ，刘孝珍 1,2，张 莎1,2，王 璐 -，冯 力 (1．中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室 ／猪传染病研究室，黑龙江 哈尔滨 150001； 2．东北农业大学，黑龙江 哈尔滨 150030) 摘 要 ：为研究猪流行性腹泻病毒(PEDV)核衣壳蛋白fN)与宿主细胞相互作用，本研究根据前期 已经鉴定的 PEDVN蛋 白核仁定位信号序列，利用重叠延伸 PCR(SOE．PCR)方法扩增出核仁定位信号序列缺失的PEDVN基 因(dN)，并将其与真核表达载体pAc．GFP．C1连接 ，构建重组质粒pAc．GFP．dN。将pAc．GFP．dN转染于VeroE6 细胞中，利用激光共聚焦显微镜分析重组质粒 pAc．GFP．dN表达蛋 白的定位情况，并利用流式细胞仪检测转染细 胞的周期变化。实验结果表 明：与完整的N蛋 白相 比，缺失核仁定位信号的N蛋 白不能定位于细胞核仁，同时 丧失了使宿主细胞周期在 G2M／期停滞的能力，从而揭示了N蛋 白核仁定位信号对宿主细胞具有重要的影响。 关键词：猪流行性腹泻病毒；核衣壳蛋白；核仁定位信号；流式细胞术；宿主细胞周期 中图分类号 ：$852．65 文献标识码 ：A 文章编号 ：1008．0589(2013)03．0173．04 Effectsonhostcellcyclebynucleolilocalizationsignalpeptidesof porcineepidemicdiarrheavirusnucleocapsidprotein LIU Sui·xin，SHIDa，CHEN Jian—fei，ZHANG Xin，SHIHong-yan，LIU Xiao—zhen，-， ZHANG Sha，-，WANG Lu，FENG Li (1．DivisionofSwineInfectiousDiseases，StateKeyLaboratoryofVeterinaryBiotechnology，HarbinVeterinaryReserachInstitute， ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Hrabin150001，China；2．NortheastAgriculturalUniversity，Harbin150030，China) Abstract：Tostudytheinteractionbetweenporcineepidemicdiarrheavirus(PEDV)Nproteinandthehostcell，thePEDVN genewasamplifiedwiththedeletionofnucleolilocalizationsignalsequenceby SOE—PCR andclonedintoeukaryoticexpression vectorpAc—GFP—C1toconstructtherecombinantplasmidpAc—GFP—dN ．VeroE6cellsweretransfectedwiht htepAc—GFP—dN and thesubcellularlocalization oftheexpressed dN protein wasanalyzedbyconfocalmicroscopy．Theeffecton cellcycleofthe trnasfectedcellwasdetectedbyflow cytometry．Th