猪流行性腹泻病毒乳酸菌载体疫苗对小鼠初步免疫试验研究.pdfVIP

动物医学进展 ，2013，34(3)：6-9 ProgressinVeterinaryM edicine 猪流行性腹泻病毒乳酸菌载体疫苗对小鼠初步免疫试验 赵 德 ，李 鹏 ，高凤山H，冯 磊 ，许崇波 (1．大连大学生命科学与技术学院，辽宁大连 116622；2．河北省涿鹿县医院，河北涿鹿 075600) 摘 要 ：猪流行性腹泻 (PED)是 由猪流行性腹泻病毒 (PEDV)引起的以腹泻、呕吐、脱水和哺乳仔猪高 死亡率为特征 的一种肠道传染病，给养猪业造成严重的损失。将构建的PEDV重组乳酸菌，诱导表达后 ，经 不同免疫方式接种 4周龄 小鼠，1周后采血应用 ELISA 方法检测血清 中的 PEDV 抗体及 IFN一，评价 PEDV乳酸茵疫苗刺激产生的体液免疫与细胞免疫水平 。同时，在免疫前后测定小鼠体重 ，评价疫苗对小鼠 生长发育的影响。结果显示，各免疫组对小鼠体重增加没有负影响，且略有增加 ；免疫后，10倍稀释 口服组 小鼠刺激产生的PEDV抗体水平最高，同时该组刺激产生的血清 IFN—y水平也最高。该PEDV乳酸茵载体 口服疫苗能够刺激小鼠产生体液免疫和一定的细胞免疫。 关键词 ：猪流行性腹泻病毒 ；抗体 ；7干扰素；酶联免疫吸附试验 中图分类号 ：$852．659．6 文献标识码 ：A 文章编号 ：1007—5038(2013)03—0006—04 猪流行性腹泻 (Porcineepidemicdiarrhea，PED) 很容易通过黏膜吸收；另外 ，该载体为食品级，不含 是由猪流行性腹泻病毒(Porcineepidemicdiarrheavi— 有任何抗生素基因或其他有害成分[5-73。利用该表 rus，PEDV)引起的以腹泻、呕吐和脱水为特征的猪 达系统研制的疫苗 ，不仅具有 良好的免疫效果 ，而且 肠道传染病 。]。从 2010年以来，猪流行性腹泻开始 具有易吸收、无副作用的特点。 在全国流行，导致仔猪腹泻，甚至死亡 ，给养猪业造成 本研究以构建的猪流行性腹泻病毒乳酸菌载体 了严重的损失 ]。目前 ，传统的猪流行性腹泻疫苗已 疫苗为免疫原接种小鼠，测定其体重增长、抗体产生 经不能完全控制疫情的传播和发生。在此情况下，研 及 IFN一7产生等 ，为猪流行性腹泻病毒乳酸菌载体 制新型的猪流行性腹泻疫苗非常必要。 疫苗在猪体的免疫试验提供参考 。 乳酸乳球菌 (Lactococcuslactis)是一种易通过 1 材料与方法 黏膜吸收的常在菌 ，适量的乳酸菌对维持肠道菌群 1．1 材料 平衡具有积极意义。NIZO公司近年来开发 了乳酸 1．1．1 实验动物 4周龄的SPF级雌性Balb／c小鼠3O 乳球菌载体表达系统 ，在该载体上表达的外源基因 只，平均体重25g，由大连医科大学实验动物中心提供。 收稿 日期 ：2012—08—31 基金项 目：大连市科学技术基金(优秀人才计划，2011J21DW015) 作者简介：赵 德 (1987一)，男，山东滕州人，硕士，主要从事动物免疫学研究。*通讯作者 ProkaryoticExpressionofOrfVirusB2L，VIR GenesandAntigenicityEvaluation LIJie，LIQian—rui，TIAN Ting-ting，XU Jun-yan，YAO Yun-liang，CHEN De-kun (CollegeofVeterinaryMedicine，NorthwestAF University，Yangling，Shaanxi，712100，China) Abstract：TodetecttheantigenicityofB2L andVIR proteinsofOrfvirus，B2L andVIR geneswereampli- fledbyPCR，thenPCR productswereconnectedtothepET一32avector．Therecombinantplasmidswere transformedintothecompetentcellBL21(DE3)，t