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猪卵母细胞孤雌激活及发育的研究进展 蔡元王金勇 张凤呜 (重庆市畜牧科学研究院 重庆 荣昌402460) 摘要猪的研究是生物技术中新的热点和经济增长点，本文综述了猪卵母细胞孤雌激活的方 法、影响因素、孤雌胚的核型、激活机制、体内外发育的最新进展情况及孤雌生殖的意义。 关键词猪卵母细胞孤雌激活孤雌发育 象。孤雌生殖现象在无脊椎动物较为普遍，在爬行类、鱼类、鸟类也存在，但是在哺乳动物中，至今 还未发现在自然条件下产生的活体。哺乳动物孤雌发育的研究始于19世纪30年代，Pincus等采用温 度和渗透压的方法激活兔卵，成功地获得卵裂，并报道移植至受体后产生了家兔后代，但这一结果至 今未能被重复。虽然如此，他们的工作为尔后的研究和发展奠定了基础。20世纪40一50年代卵母细 胞孤雌激活主要有温度、渗透压及麻醉剂等方法，实验动物主要是小鼠、大鼠、仓鼠、家兔、绵羊 等。20世纪70年代，研究者们着眼于孤雌激活的方法学研究，进入90年代，随着哺乳动物核移植 工作的开展，卵母细胞的孤雌激活得以系统的研究[1、2]，在人、牛、羊、猪、小鼠等动物的卵母细胞 孤雌激活方面都有较大进展。下面将猪卵母细胞孤雌激活及发育的研究进展进行介绍。 1 多同母细胞孤雌激活的方法 自然条件下，卵子激活是由精子穿入刺激引起的。但一些人工因素也能刺激处于MⅡ的卵母细 胞完成减数分裂，排出第二极体并继续发育。 目前，人工激活的方法有物理刺激、化学刺激和生理刺激三类。物理刺激包括机械刺激，即卵母 细胞的体外操作和穿刺处理；温度刺激，即低温和高温处理；以及电刺激处理。化学激活包括酶刺激 如透明质酸酶或链酶蛋白酶处理；渗透压即低渗或高渗处理；离子如二价阳离子或钙离子载体处理； 麻醉剂如全身麻醉、局部麻醉、乙醇处理；蛋白质合成抑制剂处理；以及蛋白质磷酸化抑制剂处理 等。生理刺激包括缺氧、卵子过分成熟和异种精子刺激等。 在猪上，人们主要用物理刺激、化学刺激以及物理刺激和化学刺激联合处理。其中电激活是应用 最多、也最有效的方法。 2 多母母细胞孤雌激活的影响因素 卵龄是影响卵母细胞激活的重要因素。在对小鼠、兔、牛等卵母细胞激活的研究中均有报道，活 化率随卵母细胞的老化而增加[¨。JieZhu等对成熟36h、40h、44h、48 h的猪卵母细胞进行了电脉 冲处理，各组之间差异显著(p0．05)，其中成熟44h的囊胚率最高[3|。 电激活的场强、脉冲时程和脉冲次数也是影响卵母细胞激活的重要因素。一次电脉冲只能引起一 次Ca2+离子升高，而多次电脉冲引起多次Ca2+升高。Jie Zhu等用不同场强、脉冲时程和脉冲次数激 · 168· 二、专业论述 活猪体外成熟的卵母细胞，所得电激活的最佳场强、脉冲时程和脉冲次数分别为1．0Kv／cm、80“s 和3次。化学介质的浓度、处理时间、激活处理后的培养液等对激活效果都有影响‘3-6]。 另外，细胞骨架的限制因子，如细胞松弛素B，对卵母细胞活化后的处理也有一定的作用。卵母 细胞激活后，经CB处理使第二极体不排出，确保卵母细胞活化后成为二倍体。 3孤雌胚的核型 正常受精时，MⅡ卵母细胞将有一半的染色体以第二极体的形式排出。而在孤雌激活时，由于刺 激因素、刺激强度、培养液的渗透压等的不同，往往使第二极体不能排出，由此所得孤雌胚的核型也 不一致。一般有以下几种核型：①激活卵排出第二极体，发育成一个单倍体原核，称为均值单倍体 (uniform haploid)；②激活卵速即分裂(immediatecleavage)成两个均等的卵裂球，一个含雌原核， 一个含第二极体核，构成嵌和单倍体(mosaichaploid)；③另一种情况是在完成第二次成熟分裂时第 二极体未排出，出现异常的延迟分裂(delayedcleavage)，同样构成嵌和单倍体；④激活卵的第二极 体未排出，有两个混合的单倍体原核组成一个二倍体核，称为杂合二倍体(heterozygousdiplid)；⑤