猪带绦虫TSO18基因工程疫苗的研制研究.pdfVIP

全国人畜共患病学术研讨会论文集§否蠢 猪带绦虫TS018基因工程疫苗的研制 才学鹏，袁改玲，郑亚东，景志忠，骆学农，贾万忠，李辉，丁军涛 (中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室，甘肃兰州730046) 蛋白进行了适度的糖基化修饰，与理论分析一致。通过对发酵条件如pH、温度和溶氧水平等的调整，重组毕赤酵母在5L发酵罐高细 G-100纯化。 Sephadex 免疫仔猪并攻虫感染。结果显示．实验各组在免疫后均产生了很高的抗体水平，从免疫保护效果来看，用pcDNA3．1／IFN一1重组质粒 作为猪囊虫重组抗原免疫增强剂。抗体检测结果没有明显升高，但是却明显增强了疫苗的保护效果。该组免疫猪减虫率最高达91％。 组减虫率分别为68．7％和67％，这可能与其诱发的免疫机制有关；在实验=中，对免疫剂量和攻虫时间进行丁适当的调整，结果从实 验猪剖检出的囊虫数分析，免疫组与非免疫组问有显著差异，以非免疫组作对照，免疫猪减虫率由70％上升到94％。 结果说明，用毕赤酵母高效表达了猪带绦虫六钩蚴TS018重组抗原，且减虫率最高达到94％，说明本疫苗具有广阔的应用前 景．有望成为预防猪囊虫病的一种新型生物制剂。 【关键词】猪囊虫病，疫苗候选基因TS018，免疫效果 猪带绦虫(Taeniasolium)是重要的人兽共患寄生1材料与方法 虫，人是其唯一的终末宿主。人囊尾蚴和绦虫在中国 1．1 大部分地区是一个重要的公共卫生问题，对人健康危 株的筛选 害很大。猪囊尾蚴感染率也较高，每年造成的经济损 用DNAStar软件在其阅读框外侧设计表达引物， 失达20亿元。传统疫苗所用抗原有全囊虫抗原、分泌 除去位于5末端的51bp的信号肽序列，并按照毕赤 代谢(ES)抗原、异源抗原以及六钩蚴抗原，这些疫苗 酵母密码子的偏爱性，将低利用率密码子GAT、GTG 都能对猪囊尾蚴病起到很好的预防作用。但由于绦虫 不能在体外培养中增殖，因而抗原来源很有限。澳大 PCR产物与载体共酶切，纯化后连接、转化到JMl09 剩亚学者Johnson{1I用基因工程方法克隆并表达了羊 中。经测序证实后，利用电转化方法。将阳性质粒转到 绦虫(Taeniaovis)六钩蚴45W抗原，用其制成的疫苗 酵母中，用不同浓度的G418筛选。 对羊的保护率达94％。这一突破性成功标志着用基因 1．2离拷贝菌株在发酵罐中的表达及表达产物的分 工程的方法研制猪囊虫疫苗是切实可行的。因此筛选 析、纯化 具有免疫原性的基因，在体外高效表达，利用几种抗 在发酵过程中，始终保持氧含量不低于50％，并用 原之间的协同作用，制成多抗原苗，是未来疫苗研究 磷酸或氨水调节pH值至5．0。其它操作按照说明书进 的方向。寄生虫疫苗具有独特性，它的免疫效果不仅 由保护性抗原决定，也与体内免疫环境有密切关系。 EndoH37℃共温育1h后，用SDS— 清夜与5¨L 此外，由于抗原分子小、纯化程度高、缺乏相关的自身 G-100分