猪卵母细胞透明带弹性系数——杨氏模量测定研究.pdfVIP

中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十三届学术研讨会论文集 猪卵母细胞透明带弹性系数一杨氏模量测定 4 卢晟盛L4木，宋立峰2爿c，滕维中3，杨绿峰2，卢克焕L (广西大学1动物繁殖研究所，2土木工程学院，3物理科学与工程技术学院， 4广西亚热带生物资源保护利用重点实验室，南宁530004) 摘要：为了探讨猪卵母细胞的生物物理特性，该文研究了猪卵母细胞透明带的力学性质。在39C 环境下，利用微管吸吮的方法在倒置显微镜下通过显微操作装置用显微玻璃管吸吮猪卵母细胞，通过自 制的专用于卵母细胞透明带杨氏模量测量软件，测量了经过44-48小时体外成熟培养的核成熟和核 未成熟猪卵母细胞(n=76，共7次重复)的透明带杨氏模量，计算得到猪卵母细胞透明带的弹性模 量为(1．43士O．29)×10‘Pa。该研究结合了生殖生物学和力学的内容，为评判哺乳动物卵母细胞和 胚胎质量开拓了新的思路和内容。 关键词：猪；卵母细胞；透明带；微管吸吮；杨氏模量 本文研究了猪卵母细胞透明带的力学性质，旨在进一步研究猪卵母细胞和胚胎在不同发育阶段 的透明带弹性模量变化及其影响因素。透明带是一层包被在卵母细胞外的糖蛋白“外衣”，它保护脆 弱的卵母细胞和胚胎不受外界伤害Ⅲ。透明带也是精子进入卵母细胞的主要障隘之一。对于哺乳动 物精子穿过透明带的机制，目前仍不十分清楚，机械理论和酶学理论均有一定的依据，目前人们推 测顶体酶类在精子与透明带结合和进入透明带中起重要作用，而精子尾部产生的机械推动对精子在 透明带中的持续前进起作用u1。可以推测，透明带在卵母细胞成熟前后、受精和胚胎早期发育过程 中可能发生一些化学和物理学变化，而这些变化可能关系到受精以及早期胚胎的发育。另外，阻止 多精子受精的机制除了雌性生殖道减少精子自发到达卵母细胞表面的数目与皮质颗粒、卵质膜封闭 作用和透明带反应n1外，是否还与透明带的力学性质有关，目前还尚未见有报道。鉴于透明带对于 受精生物学具有极其重要的作用，因此非常有必要进一步深入研究其物理(如光学、力学等)和化 学特性，尤其是透明带力学方面的特性。 杨氏模量是表征固体材料性质的一个重要的物理量，是工程设计上选用材料经常涉及的重要参 数之一。透明带杨氏模量的测定是研究其弹性变化的重要参数，目前仅见于水牛的报道心3。而猪透 明带力学性质方面的研究，国内外均未见报道。为探讨猪卵母细胞的生物物理特性，也为评判卵母 细胞和胚胎的质量开辟新的思路和内容，本研究拟运用微管吸吮的方法，在倒置显微镜下通过显微操 作装置用显微玻璃管吸吮猪卵母细胞，通过自制的专用于卵母细胞透明带杨氏模量测量软件，测量经 过44-48小时体外成熟培养的核成熟(排出第一极体)和核未成熟猪卵母细胞的透明带的弹性系数， 以建立猪卵母细胞透明带杨氏模量的测定方法。 1． 材料和方法 1．1试验时间和地点 试验时间为2005年4月15日至5月25日，试验地点为广西大学动物繁殖研究所。 1．2试剂和培养液 制培养液的用水为南宁当地自来水经三次蒸馏、经Mili-Q器过滤、最后经石英蒸馏器蒸馏的超纯水。 促卵泡素和促黄体素均为中国科学院动物研究所生产。成熟培养液为改良TCM一199液[TCMl99 母此两位作者对本研究的贡献等同。 (1)基金项目：广西科学基金资助项目(桂科青0447004)、广西科学研究与技术开发计划资助项目(桂科攻 0330004-14)。 (3)第一作者姓名：卢晟盛(1971-)，男，博士，副研究员：宋立峰(1979一)，男，硕士研究生。 87 中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十三届学术研讨会论文集 +10％(体积分数)猪卵泡液+0．57mmol／L半胱氨酸+10 Hg／mL促卵泡 ng／mL表皮生长因子+1．0 素+1．0Ug／mL促黄体素]，洗卵液和显微操作液为添加1g／LBSA的Hepes—bufferedTyrode’S medium旧。，洗管液为添加2．5g／L胰蛋白酶的磷酸缓冲液。 成熟液使用之前在含5％(体积分数)c02的空气、饱和湿度的390c培养箱中预热、平衡4小时以 上。