猪繁殖与呼吸综合征病毒LX株的理化与生物学特性研究(1)研究.pdfVIP

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会 猪繁殖与呼吸综合征病毒Lx株的理化与生物学特性研究 舒秀伟王革新张华拳周丽王文成 《辽宁益康生物制品有限公司辽宁辽阳111000) 摘要对PRRsvLx株的理化特性．生物学特性进行丁研究，结果表明，谊病毒对氨仿．乙醚，甲醛， 代病毒滴度无明显变化．效力试验蛄果表明．谊璃毒具有良好的免疫原性． 关键词猪繁殖与呼吸综合征藕毒PRRsV生物学特性 猪繁殖与呼吸综合征口orcineReproductive锄dRespiralory 引起的，以引起母猪流产，产死胎，胎儿木乃伊化和仔猪的呼吸道症状的一种传染病。本病 自1987年在美国首次报道，至今已扩散到全球所有养猪业发达的国家和地区。我国自上世 纪90年代中期发生从南到北的大流行以来，现全国大部分省市均有本病的发生与流行，严 重的制约了我国养猪业的发展及肉品贸易的健康发展。本病目前尚无有效的治疗方法，只能 采取包括疫苗接种在内的综合性防治措施。 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRsv)归属于动脉炎病毒科动脉炎病毒属成员。根据病毒基 因变异与抗原性差异，可将P褂峪v分为以Lv株为代表的欧洲株(型)和以美国ATcC vR．2332株为代表的美洲株(型)。我们从辽宁辽西某猪场分离到一株PI汛sv，为进一步鉴 定该病毒的理化、生物学特性，进行了一系列试验，现报告如下。 l材料与方法 1．1血清、病毒与细胞 Hcv、PPv、PRv阳性血清购自农业科学院哈尔滨兽医研究所，JEV阳性血清购自中 A1『ccvR．2332株、欧洲型LV株及其阳性血清、Marc．145 国医药检定所．美洲型PRRsv 细胞，由军需大学宣华教授惠赠。 1．2试验动物 Pm塔v抗体阴性仔猪及妊娠母猪由辽宁益康生物制品有限公司动物饲养中心提供。 1．3豫RSV抗体诊断试剂盒 购自美国HerdChekDExx公司，判断标准：s，PO．4为阴性，s，陉0．4为阳性。 1．4形态特性鉴定 取PRRSvLⅨ株的第3代细胞培养物，冻融3次，3000r／min离心15min，取上清， 观察j 1．5血清学特性鉴定 采用间接免疫荧光试验。 1．6理化特性鉴定 时、24小时，56℃30分钟、l小时)的敏感性。 1．7增殖力稳定性试验 将分离毒在Mark-145细胞上连续传代50代。每隔lO代进行一次滴度测定。 1．8代谢抑制试验 常规方法测定病毒液的1℃ID试验组每孔加终浓度为50ug，ml的5-碘脱氧尿嘧啶核 苷(5．IUDR)，对照组不加5-碘脱氧尿嘧啶核苷。比较二者的代ID加 猪的传染病 1．9细胞适应性试验 胞病变情况，不出现病变者，盲传3代。 2结果 2．1电镜观察 对分离毒第3代培养物进行电镜观察，均可见略呈球形、有囊膜的病毒粒子．囊膜上有 纤突．病毒大小以55m～70nm为主。 2．2间接免疫荧光试验 在荧光显微镜下，阳性血清出现明显特异性荧光，而阴性血清和空白对照无荧光。其中 美洲型标准阳性血清产生的荧光明显强于欧洲型阳性血清的荧光。 2．3理化特性试验结果 测定结果表明，分离毒Lx株对氯仿(37℃15分钟)、乙醚(4℃18小时)、甲醛(4℃2 l小时)等处理条件敏感。而对pH7．2，4℃2小时不敏感。结果见表l。 表l：不同条件处理病毒滴度变化结果 2．4增殖力稳定性试验 对分离毒从第3代开始，在Marc．145细胞上连续传代至50代，并在第10代、第20代、 第30代、第40代和第50代进行病毒含量的测定(表2)。结果表明．分离毒在Ma静145细 o一107 胞上连续传50代，其病毒含量较为稳定，在106 oTcID5舯．1ml之间。 塞：望堕垄堡星生蔓墅堑墨 代次 3代 10代 20代 30代 40代 50代 2．5代谢抑制试验 用5．碘脱氧尿嘧啶核苷处理病毒后，进行TCID50的测定，结果试验组与对照组无明显 差异，说明5．碘脱氧尿嘧啶核苷不能抑制该病毒在Marc．145细胞上的增殖，从而判定该病 毒为RNA病毒。 2．6细胞适应性结果 有