猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体的制备与特性分析研究.pdfVIP

猪的传染病 适量的猪190在体外发生反应后能够呈现肉眼可见的红色斑点。由于用来免疫兔子的猪IgG 为健康猪的kG，因此免疫兔子后分离提纯的兔抗猪IgG与PImsv结合应用，依据被检猪 血清中是否有能与PRRsV结合的lgG。进而能否与兔抗猪IgG结合来判断PRRSv抗体阴 阳性．判断的依据是是否呈肉眼可见的红色斑点。 4结语 本文所设计的检测Pm峪v抗体的DIGFA是一种微量、敏感、特异、快速、简便的检 测方法。该方法的原料来源较容易，如果进一步制成试剂盒。即可作为监测和诊断P砌tS 的常规手段【2】．同时，本方法中制各兔抗猪kG可以与其它病毒如PRv、PPv、Hcv等结 合使用可建立更多的用于检测PRV抗体、PPV抗体、HCV抗体的方法。给我国诊断这些疫 病提供简便、有效的方法。 猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体的制备与特性分析‘ 陈仕龙u．林天龙”，陈少莺1一，庄向生’．一，王隆柏L3，魏宏u．周伦江1一，车勇良u，黄梅清u (1．福建省农业科学院畜牧兽医研究所，福州福建350013；2．福建省农业科学院生物技术研究所。福 州福建350013；3．福建省畜禽疲病防治工程技术研究中心，福州福建350叭3) 摘要采用差速和蔗糖不连续密度梯度离心纯化的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRsv)免疫Balb，c小鼠， 取脾细胞与s啪骨髓瘤细胞按常规方法进行细胞融合，经间接ELlsA筛选，获得三株稳定分泌抗PRRSv单 均具有ELIsA，IFA和wesⅫn blot特性。细胞上清液和腹水的ELIsA抗体效价分别为26~28和l05—106．IFA测 均呈免疫荧光阳性．特异性测定表明三株单抗与Marc．145细胞、猪2型圆环藕毒和猪细小病毒均无交叉反应． Ⅵk咖blm测定表明三株单抗均能识别PRRsv—GP5蛋白．上述结果表明三株单抗均能特异性地识别 PRRsv毒株。为PRRs免疫诊断试卉J盒的研制奠定基础． 关键词PRRSv；单克隆抗体；ELlsA：IFA：we咖mblot 猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcinereproduct．、吧a11drespi眦ory synd∞mevims，PRRsⅥ引起的一种严重危害养猪业的烈性传染病…。PRRSv属动脉炎病毒 virIIs， 科动脉炎病毒属。1987年美国首次报道该病口J，1991年，荷兰首先分离到病毒(Lelv咖d LV)Ⅲ。1996年郭宝清在国内首次分离到Hmsv．证实本病在中国存在n2002年庄向生等 从福州某败血症的病猪中分离到PRRSV，命名为PRRsv．Fz’经鉴定证实该毒株为美洲型【5． ”。由于北美和欧洲两基因型PRRSV之间抗原性差异及不同毒株之间的抗原变异和致病性差 异“1，不仅使PRRSV流行病学问题复杂化，而且造成了PRRSv免疫预防和精确诊断的难度。 为了进一步探讨PRRSV抗原变异状况，分析PRRSV毒株间保守抗原位点，建立能够检出各 种PRRsV毒株的检测方法，我们采用PRRsv．Fz株为免疫原，制备了相应单克隆抗体，现将 结果报道如下： 1材料和方法 1．1病毒、细胞和实验动物 Pm峪v-FZ由本室分离、鉴定々Balb／c小鼠购自上海斯莱克实验动物有限责任公司。 1．2主要试剂 弗氏完全佐剂和不完全佐剂、RPh耵1 ‘作者简介：睐仕龙(1979-)，男，硕士，助理研究员，从事动物传染病免疫学研究． 通讯作者：林天龙(1955·)，男，研究员，主要从事生物技术研究． 中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会 州四季青生物材料有限公司) 1．3抗原制备 000Pmi 000 n-l离心 反复冻融三次．超声裂解，8 rm酊1离心50min，弃沉淀，取上清液。45 120 min，用O．01m01·L．IPBS(PH7．2)悬浮沉淀，即为粗提抗原，用于ELISA包被t取粗提 000 min， 抗原铺垫于25