猪繁殖与呼吸综合征病毒PRRSVS1株GP3蛋白的原核表达与纯化研究.pdfVIP

第六次全国会员代表大会暨第11次学术研讨会 的主要毒力基因，同时也是病毒复制的非必需基因，TK-表型的PRV变异株在神经细胞中的复制能力大为 减弱，故TK基因多年来一直成为构建PRV基因缺失疫苗的首选靶基因。本研究室己构建以TK基因为同 源臂的伪狂犬通用转移载体。利用此通用转移载体可构建双价及多价重组病犁“丌。本试验对此通用转移 E2，PRRSV 载体进行了改造，构建了以lacZ为筛选标记并同时表达CSFV GP5基因的三基因转移载体， 以脂肢体为介质包裹质粒载体DNA与PRV基因组共转染VERO细胞，待细胞完全病交后收获毒液。在 X．gal存在的条件下，挑选蓝色蚀斑传代，进行数次蚀斑克隆传代筛选并纯化重组病毒，同时利用Western 免疫印迹试验与间接免疫荧光试验检测E2与GP5的表达情况，并对重组病毒的生物学特性进行了初步分 析。 E2与PRRSVGP5特异性引物PCR扩增得到目的的 进行三轮的噬斑纯化后提取病毒DNA，经CSFV 应条带，利用PRRSV高免血清从重组病毒感染的细胞中检测到大小约为34ku的反应条带，结果表明GP5、 E2基因都获得了表达并具有抗原反应活性。间接免疫荧光试验也证明E2与GP5得到了表达。 两种病毒引起的病变和蚀斑形态没有明显的变化。证明TK基因的缺失和E2与GP5基因的插入对病毒的 生长和复制没有造成影响。 猪瘟病毒的主要保护性抗原基因为E2基因，G巧基因为猪繁殖与呼吸系统综合症病毒的主要保护性 抗原，且在现行猪瘟和猪伪狂犬病及猪繁殖与呼吸系统综合症的免疫程序中，三者免疫时机是一致或靠近 GP5 GP5基因构建重组活载体，拯救出重组病毒，为构建CSFVE2基因PRRSV 插入CSFVE2基因PRRSV 基因重组PRV活载体疫苗打下了基础。 ‘ 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) S1株GP3蛋白的原核表达与纯化 蒋文明，姜平¨，李玉峰 (南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室，江苏南京210095) GP3)。 BL21细胞中用IPTG诱导表达了猪繁殖与呼吸综合征 将tGP3克隆至原核高效表达载体pRSET，在E．coli 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒；GP3；原核表达 猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine and Syndrome ReproductiveRespiratory J。本病给世界和 Virus，PRRSV)引起的、以怀孕母猪繁殖障碍和仔猪的呼吸道症状为特征的一种传染病ll 我国养猪业造成了巨大的经济损失，现已成为危害规模化养猪生产的主要疫病之一。国内外学者对PRRSV 次要结构蛋白，是一种糖基化蛋白，在病毒的致病性、病毒复制、’病毒装配、病毒变异和保护性反应等方 面可能具有重要意义【2’3】。Plana等报道用杆状病毒表达的ORF3的基因产物免疫母猪，对怀孕母猪可以提 供68．4％的保护力【41。因此研究和分析该蛋白的免疫特性及其功能具有十分重要的理论意义。本研究采用 原核高效表达载体pRSET在E．coli 215 猪传染弱 结构与功能奠定了基础。 1 材料与方法 1．1主要试剂及材料 重组质