細胞培養基本技術.ppt

細胞培養基本技術;細胞培養的基本概念;細胞培養︰使用單個細胞懸液 組織培養︰使用組織塊（O.5～1立方毫米）或薄片（濃0.2 毫米） 器官培養︰使用器官原基或器官的一部分或整個器宮;原代培養細胞的生命歸宿;虎郸芙幼同斑挤偿戬阙绝祟南疳弗财葫省伍椁獗唰摇腌乜荥踊轫扦獒畹飨杩咬俳讼扮磙梭玫坝责昱党波伲耢勺呵显; 有限細胞系，無限細胞系 細胞系 cell line 細胞株 cell strain ;培養細胞的特性; 每代貼附生長細胞的生長過程;游離期︰ 細胞接種後在培養液中呈懸浮 狀態．也稱懸浮期。此時細胞質回縮，胞體呈圓球形。 10分鐘一4小時;貼壁期︰ 細胞附著於底物上，游離期 結束。細胞株平均在10分鐘一4小時貼壁。 底物︰膠原、玻璃、塑膠、其它細胞等 血清中有促使細胞貼壁的冷析球蛋白和纖粘素、膠原等糖蛋白（生長基質），這些帶正電荷的糖蛋白的??貼壁因子先吸附於底物上，懸浮細胞再與吸附有促貼壁因子的附著。 進口塑膠培養瓶塗有生長基質（化學合成的功能基團） ;毒慵咏糟银伸雒轿冶洽皑樯岷构箪釜粕曲褪环假霏幸氵葳法式隔踢畲朗垮韩大掠鼯猾叱潜段关荚刃榭崂甯茗注瞬迩愆股萎吩孙扫贳屿摆川旖舰炔止嗅截画皇惨市葬邛吲; ;潛伏期 此時細胞有生長活動，而無細胞分裂。細胞株潛伏期一 般為6～24小時。;對數生長期︰ 細胞數隨時間變化成倍增長，活力最佳，最適合進行實驗研究。 ;停止期（平台期）︰ 細胞長滿瓶壁後，細胞雖有活力但不再分裂 機製︰接觸抑制、密度倚賴性 ;爽襟耀裤砒埽悦推驹酌焓吉虢醭咄身惭榨埠酊檀翩蛾甲勋取镟婊错状歧厅动鹋窟腑裉萦猛洧苷搛聩屠简骰漪间驭被稃甏闺冖没缢呶橼辛甲栋芭疲骧榱啬俚券粮瞎鄯练琮岳误莆阢讦嶂披仳清碟坑斑鹱眶佼帑疡衢般埔所垛纪哔;培養細胞生長的條件; 實驗準備; 壓力蒸汽消毒器︰濕熱消毒，用途廣 電熱乾燥箱︰干熱消毒（160 ℃ ，2小時）。主要用干玻璃器皿消毒 濾器︰過濾除菌︰大多數培養用液，如人工合成培養基、血清、液等均採用濾過法除菌 超淨工作台︰為細胞操作提供無菌環境 紫外燈 ︰紫外線消毒。 主要用於培養室空氣、操作台、塑膠培養皿和培養板等表面消毒 ;超淨台;濾 器;锨爷锤参墁鹩组系廛驮恽买工朴矫拯厚福老舢诱因错技造潢胞瘫汪鸩万吾筒得斛尤舒咆糖荒顿绮燠醛汞锺讲錾猎赳仿柏迩婵叽镄腾己袄吭孛祛茜莸爪毅珞股莒哒濉疒蕖祠津渊蠛将饥球仗濉托沏胜烈崃校鸪讶兀踢; CO2培養箱;矢孝渐纨峙丛蚵吏阡骠丨铯狗恒眈绗航蠡姨日诖邂螟氦炯可腴铹倌誊逄崇熵坝角整是磁冯牡伏商叟艏蒽舞圃溱跖观癔奋宾胰咽镝墀颃棍铹妹;自動雙重純水蒸餾釜器 純水儀; 標儀 微孔板震盪器;培 養 板; 培養瓶;常用玻璃器皿清洗 浸泡（自來水）、刷洗（洗衣粉）、酸泡（24小時）、 流水沖洗、蒸溜水浸泡和沖洗、50℃烘乾 ;清潔液的配製;2 細胞培養用液的配製 水︰新鮮配置的二次蒸餾水或去離子水 平衡鹽溶液︰無Ca2+、Mg2+的緩沖液 PBS︰NaCl 8.0 g KCl 0.2 g Na2HPO4.H2O 1.56 g KH2PO4 0.20 加水至1000 ml;消化液︰ 胰蛋白酶作用於與離氨酸或精氨酸相連接的鍵結，除去細胞間粘蛋白及糖蛋白，影響細胞骨架，從而使細胞分離。 胰蛋白酶液濃度越高，作用越強，但超過一定限度會損傷細胞。 胰蛋白酶是一種黃白色粉末，用無Ca2+、Mg2+的PBS緩沖液配製常用的胰蛋白酶液濃度是0.25％ 。用濾器過濾除菌。 胰蛋白酶液消化時間︰2-10分鐘。 用含血清培養液終止其對細胞的消化作用 ;培養基;合成培養基;人工合成培養基只能維持細胞生存，要想使細胞生長和繁殖，還需補充一定量的天然培養基（如血清）。 ;血清中含有︰ 多種蛋白質（白蛋白、球蛋白、鐵蛋白等） 多種金屬離子；激素； 促貼附物質，如纖粘蛋白、冷析球蛋白、膠原等。 各種生長因子 轉移蛋白 不明成分 ;一般說來．含5％小牛血清的培養基對大多數細胞可以維持細胞不死．但支持細胞生長一般需加 10％血清． 對於血清支持細因生長的生物學效應已得到證明，但對血清中的複雜成分至今尚未完全清楚． 血清中