扩张床分离 吴慎剑.pptVIP

小分子 链霉素发酵液的不过滤直接用离子交换分离提取，其分离过程是链霉素发酵结束后仅先酸化后中和，而不过滤除去菌丝及固形物，直接从交换柱的下部，以表观流速115～146 cm·h叫送入柱中进行吸附，含菌丝及固形物的残液从柱上部流}H，待穿透后切断进料，用清水逆洗，将滞留的菌体和固形物等杂质除净，然后用稀硫酸洗脱并分段收集洗出液送去精制，离子交换柱则用酸和碱再生。扩张床过程将固液分离、吸附、浓缩集成在一起，大大简化了操作步骤，并使链霉素的收率大幅度地提高 6)扩张床吸附技术的应用 扩张床吸附技术已广泛应用于包涵体、胞内、围膜、胞外分泌；酵母菌、动物细胞、杂交瘤、昆虫细胞等表达的重组生物产品的纯化，亦被应用于动植物组织、果汁、动物乳汁以及其它一些微生物中目标产物的提取，也可将扩张床用作生物反应器和生物物质的检测装置，其分离规模也正从中试向工业化方向发展 7.扩张床吸附存在的问题 ①深入研究多孔介质在流场中的运动，这直接影响扩张床的设计、选用、操作和放大。 ②研制在稳定性、特异性和吸附容量方面都适于扩张床操作的介质。细胞破碎液中含有大量杂质，影响吸附效果。吸附容量过大会使层析介质在吸附阶段有效密度变化较大，给床层扩张度控制带来困难。 ③改进清洗过程。清洗过程几乎占整个操作时间的一半，而且所用清洗液条件比较苛刻，易损坏层析介质。 汇报结束 扩张床分离 汇报人：吴慎剑 日 期：2012.11.7 扩张床吸附技术 概述 扩张床的吸附原理 扩张床吸附基质及装置 细胞及碎片对吸附剂性能的影响 扩张床 操作 扩张床 吸附存在的问题及前景 一、概述 它集过滤、浓缩和初步纯化于一步完成，减少了操作步骤，缩短了操作时间，能提高收率和降低成本。 发酵液或培养液的体积大、黏度高，故处理难、费时多，常使目标蛋白质受到蛋白酶、糖苷酶的作用而被破坏。故第一步操作常常成为整个下游过程的制约步骤。 扩张床吸附技术是一种集成化分离技术，即对已有的两种单元操作进行有效的组合，组成一种更有效的单元操作，以达到提高产品收率，缩短纯化步骤，降低纯化费用和投资成本的目的。 细胞悬浮液具有以下的特点 目标产物浓度普遍比较低； 组分非常复杂，是含有细胞、细胞碎片、蛋白质、核酸、脂类、糖类和无机盐类等多种物质的混合物； 产物易失活，性质不稳定，易被空气氧化、易受微生物污染、易被蛋白酶水解 二、扩张床的吸附原理 发酵液内含有大量的颗粒，这些颗粒要在进行层析前除去。目前除去固体颗粒最常用的方法是离心和过滤。 离心和过滤工艺的缺点： 1.步骤多，累积损失大； 2.操作时间长，目标产物易失活； 3.对微米以下的颗粒，特别是对细胞碎片很难有效除去； 4.投入高速离心机和超滤设备，增加了生产成本。 离心、过滤： 步骤多，累积损失大，操作时间长，目标产物易失活，对微米以下的颗粒难除去，设备成本高。 相当于一个平衡级，效率差 空隙小，易造成堵塞，床层压降增大 返混严重 平推流，空隙率大，压降小，吸附剂利用率高 平推流是理想状态下在流动方向上完全没有返混，而在垂直于流动方向的平面上达到最大程度的混合。 上图是全混釜、流化床、扩张床和固定床的操作模式的比较。其中全混釜上料液处于理想混合时，只相当于一个平衡级，其效率比固定床差。一般液固相分离主要采取固定床方式，料液流经装有层析介质的柱时在介质层中流动基本上呈平推流，返混小，柱效高。但当料液中含有固体颗粒时，由于介质问的空隙很小，颗粒滞留在介质间，造成堵塞，床层的压降增大，最终使吸附无法进行，所以采用这种层析方法之前必须对原料液进行固液分离。 几个概念 1.最低流化速度 ：料液自下向上运动，当达到某一速度时，床层开始扩展，称为最低流化速度 2.终点沉降速度：床层继续随流速的增大而不断扩张，吸附剂间隙增大，悬浮颗粒能通过，吸附剂仍能保持不被带出的最大流速 3.床层空隙率：扩张床高度与沉降高度之比。 三、扩张床吸附基质特性要求 吸附剂的尺寸和密度应保证其终端流速与料液中需除去的固形颗粒间有明显的差异； 吸附剂必须有一定的粒径和密度分布，在扩张床中会形成稳定的分级，从而减小固液相问的返混； 吸附剂应具有良好的孔道结构，不易被料液中的脂类、核酸和杂蛋白等生物物质污染； 吸附剂应具有特异性吸附的配基，使吸附剂对目标产物具有较高的吸附容量； 吸附剂应具有较高的化学稳定性和良好的机械强度，其中较高的化学稳定性可以保证吸附剂可以承受较苛刻的洗脱条件，而良好的机械强度可延长吸附剂的使用寿命； 吸附剂应具有良好的传质性能，在较高的流速下，可以保持较高的吸附量。 商品化的扩张床/流化床介质 介质名称 直径/um 密度/(g/mL) 表观液体流速(cm/min) 琼脂糖-石英 100-300 1.15 3.