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微核实验PPT
实验五 植物细胞的微核检测 一、实验目的 1、了解细胞微核形成的机理及其形态特点； 2、学习蚕豆根尖细胞的微核检测技术。 二，实验原理 1，微核是真核类生物细胞中的一种异常结构，往往是细胞经辐射或化学药物的作用而产生的。在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3以下。微核的折光率及细胞化学反应性质和主核一样，也具合成DNA的能力。 3，本次试验主要采用煮沸的烟叶汁为材料，对培养的蚕豆根尖进行处理，并且通过固定，染色，镜检，观察微核的出现情况。于此同时用一定浓度的茶叶汁进行对照处理，研究茶叶汁是否能够对烟水的毒害产生缓冲作用。 三，实验材料 大丰收牌香烟，绿茶，蚕豆， 四，实验仪器 显微镜、恒温培养箱、恒温水浴锅、 镊子、载玻片及盖玻片等。 五：实验步骤 1、浸种催芽：选饱满蚕豆种子，放于蒸馏水中浸泡24小时，此间换水两次。待种子吸胀后，转入铺有脱脂棉的培养皿中培养，每天换水一次培养三天，初生根长1~2厘米待用。 2、处理根尖：取1.25克香烟丝于烧杯中加入250毫升蒸馏水加热煮沸，冷却后待用。 取4.7克茶叶于烧杯中加入300毫升蒸馏水加热煮沸冷却后过滤待用 取6只培养皿，铺上脱脂棉，将检测液分别加入培养皿中，并且编号，另取一组加蒸馏水的培养皿做对照组，分别选取4枚蚕豆放于脱脂棉上，培养24小时 培养皿编号： 1：未稀释的烟汁 2：烟汁：蒸馏水=1：1 3：烟汁：蒸馏水=1：3 4：烟汁：蒸馏水=1：5 5: 烟汁：茶水：蒸馏水 =1：1：1 6：蒸馏水 3、恢复培养：：处理后的根尖用自来水浸洗3次，每次2-3min，洗净后在水中恢复培养24h。 4、固定：用甲醛：冰醋酸（3：1）固定液固定24h后弃去固定液。 5、酸解： 弃去固定液，用清水漂洗2-3次，吸净水，加入6M盐酸，于室温解 离10min，弃去盐酸，漂洗根尖2-3次，彻底洗净 盐酸。 ★注意事项： ★培养蚕豆时需勤换水 ★处理蚕豆时要将根部浸没于处理液中 ★固定液要现配现用 六，实验成果 七，结论分析 经实验观察： ☆对照组未出现微核。 MCN‰=7‰左右 ☆烟水：蒸馏水=1：5出现的微核较少。MCN‰=60‰左右，污染指标（PI）=8.57 ☆烟水：蒸馏水=1：1的处理液微核出现的最明显。MCN‰=100‰左右，污染指标（PI）=14.29 ☆未稀释的烟水和烟水：蒸馏水：茶水=1：1：1的根尖长势不好。MCN‰=18‰左右，浓度太大，导致根尖不生长，在此忽略此结果 1表示对照组蒸馏水 2表示烟汁：蒸馏水=1：5 3表示烟汁：蒸馏水=1：1 * 6、染色：截下1-2mm长的根尖，滴加石炭酸品红染液， 染色10min，加盖玻片，压片，镜检观察。 对照组 实验组 有丝分裂前期 有丝分裂中期 有丝分裂后期 有丝分裂末期 分裂后的细胞 *
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