流式细胞术快速检测生乳中细菌总数.docx

流式细胞术快速检测生乳中细菌总数宁 3王宁 ,刘(东北农业大学乳品科学教育部重点实验室 ,黑龙江哈尔滨 150030 )法耗时长 ,不能及时检测不易繁殖的细菌 。近年来 ,微生物的快 速检 测 得到 了很 大 的发 展 , 比 较成 熟的 有化 学 发 光 法 、A TP 生 物 发 光 法 、固 相 细 胞 计 数 法[ 4 , 8 , 9 ]等 。但这些 方 法 还 存 在 很 多 的 缺 陷 , 如 检 测 限高 、精确度低 和 费用 昂贵 。流式 细 胞仪 是 一款 功 能 强大的细胞分析 、计数设备 。它兼具准确性高 、分析快速的优点 。由于生乳的成分复杂 ,干扰因素多 ,导致流式细胞仪还不能对生乳进行微生物检测 。本文 对生乳中干 扰物 质 的前 处理 方 法进 行 了研 究 , 初步 建立了流 式 细 胞 术 快 速 检 测 生 乳 中 细 菌 总 数 的 方 法 ,并和国家标准检测方法进行比较 ,进行了准确性 和灵敏度的验证 。1 材料与方法1 11 材料与仪器UH T乳 超市出售 的某 一 品牌 产 品 ; 生乳私 营奶户提 供 ; 蛋 白 酶 K、碘 化 丙 锭 ( P I) 、胰 蛋 白 酶 、摘 要 :研究了应用流式细胞术检测生乳中细菌总数的方法 。实验对生乳采用酶法消化蛋白质颗粒 、高速离心脱脂的方式 来消除大颗粒物质对流式检测的影响 。并对菌体进行热 处理 ,使其能被荧光性染料碘化丙锭染色 。经过前处理的 乳液进入流式细胞仪分析 、计数 。结果表明 , 流式细胞术 与平皿菌落计数法呈正的直线相关 ( P 0101 ) ,相关程度为显著相关 ( r = 019360 ) 。该方法极大的缩短了检测时间 , 检出限为 104 /mL。关键词 :流式细胞术 ,生乳 ,细菌总数 ,平皿菌落计数法A b s tra c t: A m e th o d o f flow c y tom e try ( FCM ) to m ic ro b ia l a n a lys is o f raw m ilk w a s in ve s tig a te d 1 Th e p re s e n c e o f m ilk p ro te in s a n d lip id p a rtic le s h am p e rs m ic ro b ia l a n a lys is b y FCM 1 Th e re fo re , w e a p p lie d e n z ym a tic tre a tm e n t to d ig e s t p ro te in s a n d tre a tm e n t o f m ilk b y c e n trifu g a tio n to rem o ve lip id s 1H e a t - p ro c e s s e d tre a tm e n t to b a c te ria o f m ilk w a s u s e d fo r th e s a ke o f th e b a c te ria c o u ld b e s ta in e d w ith P I1 Tre a te d m ilks am p le s w e re d e te c te d a n d e n um e ra te d b y FCM 1R aw m ilk d a ta s h ow e d a s ig n ific a n t c o rre la tio n ( P 0 10 1 ) a n d a g o o d a g re em e n t ( r = 0 19 3 6 0 )b e tw e e n FCM a n d s ta n d a rd p la te c o u n t m e th o d s 1 Th eTritonX - 100 等购 于 Sigm a 公 司 ; 大 肠 杆 菌( E1co li) 、金黄色葡萄球菌 ( S 1au reus) 由东北农业大学乳品科学教育部重点实验室提供 。EP ICS XL 型 流 式 细 胞 仪B eckm an - cou lte r公司 ;透明循环水浴槽 上海一恒科技有限公司 ; 生物d e te c tio n lim it o f th e FCM a s s a y w a s 1 0 /m L 1 Th e p ro c e s s o n ly ta ke ra th e r s h o rt tim