微生物发酵PPT(培养技术).pptVIP

* 微生物发酵过程的多种培养技术 * 微生物发酵是一种很复杂的生化过程, 除了与菌种的生产性能有关, 还与培养基的配比、原料的质量、灭菌条件、发酵条件和过程控制等有密切关系。传统的微生物发酵过程主要有分批、半连续、分批补料、连续发酵等几种方式, 不同的培养技术各有其优缺点。了解生产菌种在不同的生产工艺条件下的细胞生长、代谢和产物合成的变化规律将有助于发酵过程的控制。 * 分批培养 稳定 期 分批培养过程中微生物生长过程 延滞 期 对数生长期 衰减 期 分批发酵是一种封闭培养系统, 含有初始限制量的基质的发酵方式, 菌体接种到培养基后除了气体流通外发酵液始终留在生物反应器内。 * 分批培养的产物大概可以分为两种： （1）与生长联动的产物。相当于初级代谢产物, 由正在生长的细胞合成。 （2）与生长不联动的产物。相当于次级代谢产物,多在稳定期中合成。 * 分批培养的优势： 操作简便, 周期短,染菌的机会减少和生产过程、产品质量较易掌握,并且分批发酵在优势条件下对数生长期会以最大生长率生长。 分批培养的局限： （1）培养过程中存在基质抑制问题, 生长受到限制, 包含有底物限制和毒素限制两种,如果对基质浓度敏感或是对毒素累积敏感的产物,采用分批培养不合适,产率较低。 （2）进行分批操作时,每次工作前都要进行设备、材料、培养基等的灭菌,消耗较多的人力和时间等。 * 分批补料培养 在发酵开始时投人一定量的基础培养基,到发酵过程的适当时期, 开始连续补加碳源、氮源、其他必需基质,直至发酵液体积达到发酵罐最大操作容积后, 将发酵液一次全部放出, 这种操作方式称为分批补料发酵。 * 分批补料培养, 最初以分批方式建立, 因为简单分批发酵不能维持一定的菌体浓度, 当基质消耗后菌体将加速死亡, 使活细胞数量迅速下降,分批补料由于持续供给菌体维持和生长所需的营养,故能保持发酵液中有较高的活菌体浓度,从而克服上述缺点。另外,不断的补料稀释, 对降低发酵液的粘度, 改善流变学性质, 强化好氧发酵的供氧,也是十分有利的。 * 分批补料发酵目前已广泛应用于各种发酵产品的工业生产中, 与传统的分批发酵相比,优点在于使发酵系统中维持很低的基质浓度。 低基质浓度的优点： （1）可以除去快速利用碳源的阻遏效应, 并维持适当的菌体浓度,使不至于加剧供氧的矛盾。 （2）避免培养基积累有毒代谢物。与连续发酵相比, 分批补料发酵不需要严格的无菌条件,也不会产生菌种老化和变异等问题。 * 连续培养 连续培养是发酵过程中一面补入新鲜的料液,一面以相同的流速放料, 维持发酵液在原来的体积。连续发酵是一个开放系统, 通过连续流加新鲜培养基并以相同的流量连续地排出发酵液, 可以使微生物细胞群体保持稳定的生长环境和生长状态,并以发酵中的各个变量都能达到恒定值而区别于瞬变状态的分批发酵。 * 连续发酵具有的优点： （1）能够维持较低的基质浓度可以维持稳定的操作条件。 （2）连续培养具有稳态优势, 从而使产率和产品质量也相应的保持稳定。 （3）便于自动控制, 有效的实现机械化和自动化, 降低劳动强度,减少操作人员与病原微生物和毒性产物接触的机会。 （4）减少设备清洗、准备和灭菌等非生产占用时间,提高设备利用率,节省劳动力和工时。 （5）由于灭菌次数少, 使测量仪器探头的寿命得以延长容易对过程进行优化,有效的提高发酵产率。 * 连续发酵的不足： （1）对仪器、设备及控制元件的技术要求较高, 从而增加投资成本。 （2）连续培养是开放系统,并且发酵周期长, 有极大的可能性造成菌体染菌,这也是生产成败的关键问题。 （3）在长期的发酵过程中,微生物容易发生变异, 菌株退化问题也限制了大型连续培养生产,生产慢的高产菌株很可能逐渐被生长快的低产变异菌株取代,从而降低生产效率。 （4）丝状真菌菌体容易附着在器壁上生长以及在发酵液内结团, 给连续发酵操作带来困难。 * 其它重要技术 1 膜分离与发酵的耦合 膜生物反应器可以分为两类：第一类用膜保留培养物, 使之悬浮于生物反应器中,不会因微滤或透析作用使细胞流失。因而水流和培养物在反应系统中的持留时间各异。第二类把生物催化剂固定在膜表面上或网格中或夹持在两张膜的中间, 因此, 生物催化剂是不能运动的。 膜技术的优点：避免菌体丢失；排除有害代谢物,避免或减轻产物的反馈抑制,从而使高密度细胞培养成为可能；可以提高发酵中有机酸的产率, 乙醇、丙酮、丁醇发酵的反馈抑制, 在基因工程菌的培养、超氧歧化酶生产、单克隆抗体生产等方面都能达到较高的产率。 * 2 高细胞密度培养 高细胞密度培养一般指微生物沉没培养时其细胞浓度达到100g/L以上的水平。最早应用于生产单细胞蛋白、乙醇等。可用于高细胞密度培养的生物反应器类型有常用的搅拌罐和带有外置式