靶向preCC基因特异性RNA干扰对乙型肝炎病毒在肝癌细胞系中复制与表达的影响.pdfVIP

．768- 史堡匡堂盘盍垫!兰生!旦垫旦筮!兰鲞筮!!魍塑鲤!!鲤』垦塾迪：丛竺照垫：垫!至，!些丝：坠!! ．基础研究． 靶向preC／C基因特异性RNA干扰 对乙型肝炎病毒在肝癌细胞系中 复制与表达的影响 边中启 刘霜 刘明秋 肖安 焦晔严维耀 郑兆鑫 【摘要】 目的探讨靶向乙型肝炎病毒(HBV)preC／C基因的小干扰RNA(siRNA)在人类肝癌 细胞系Huh-7细胞和HepG2．2．15细胞中抗病毒基因治疗效果。方法根据GenBank中HBV (GenBank登录号U95551)基因组序列，设计合成靶向HBVpreC／C基因的3个长21核苷酸(nt)的 siRNA，设计1个对照的非同源长2Int的siRNA，分别克隆到pU6质粒中，构建3个shRNA表达载体 pU6-C1，pU6·C2，pU6一C3和对照pU6．CA；为了检测siRNA功能建立报告基因系统，以pT．HBVl．3为 模板，PCR合成目的基因preC／C，克隆到绿色荧光蛋白(EGFP)表达载体(pEGFP．NI)中构建携带 EGFP报告基因的重组质粒pEGFP．preC／C(E-C)。将构建的3个shRNA表达载体与E．C共转染