采用RNA干扰技术分析拟南芥Ca2+泵基因ECA1的功能.pdfVIP

植物生理学通讯第44卷第3期，2008年6月 469 采用砌悄干扰技术分析拟南芥Ca“泵基因层CAJ的功能 朱炜1，一，黄丛林1，张秀海1，王永勤1，魏建民2，于荣3，吴忠义1，+ 1北京市农林科学院北京农业生物技术研究中心，北京100097；2内蒙古农业大学生物工程学院，呼和浩特0lOOl8； 3首都师范大学生命科学学院，北京100037 、 芥，用卡那霉素筛选和PCR检测，获得了11个L代纯合体转基因株系；半定量RT．PcR方法检测蜀以J在转基因株系中 转录的结果表明，其转录产物比野生型(WT)明显低，且转基因株系之间差异明显，表达水平有一个梯度关系；在l，2MS 培养基上转基因株系与野生型的差异不明显，相对于野生型而言，在相对低Ca2+(0．2蛐01．Ld)或相对高Mn2+(o．5Imn01．L‘1) 的培养基上的转基因株系生长受到不同程度的抑制，Ec．AJ转录量越低，生长受到的抑制越大．据此认为：层CAJ对植物的 生长发育和抵御逆境胁迫有作用。 关键词：Ca“泵；RNA干扰(1tNAi)；转录后基因沉默 ofE(=!AJFunctionRNAInterferencein Analysis by A，狻易Z却s括砌口Z谊以口 zHu weil”，HuANG xiu-Hail，wANG JiaIl-Min2，Yuzhong·Yil’， cong-Linl，zHANG Yong-Qinl，wEI Ron矿，wu n以ForestrySciences．8e珏inglo0097．c岫m： lBeij讯gAgro—Btotecholo酚Rese8rchCemer．Be珏讯gAc以e州珂AgncHltlIMl 2coltege西Biolo科Engtttee出jg．IR腿rMongo乩AgricultllrmU仡ive懈i鸭Hohhot Non觚t lo0037。Chin口 Un如ers协．Beijtng Abstract：TheRNA calciuI玎L-trans— interf色rence(RNAi)vectorcontaillingE(’AJ(endoplasmicreticulum—type ATPase thesenseantisenseorientationswasconstrlJctedandtrans- porting 1)gene．speciflcsequencesin and fomedinto 11ho· A阳易fdDps括历日Zf口胛口plantbyA譬rD6口c纪一“mf“mP厂口cfP，ls．mediatedtransfomation，and PCR lineswereobtained and Inozygous throughkanamycinscreening assays．Thetranscriptional transgenic ofEI：HJin lineswas reduced withthatofwild seIni— product transgenic obViouslycomparing type(WT)by some in be- quantitVR，FPCRanalVsis．InadditiOn。therewere remarkabledifferencesECAJmRNAproducts 铆een lines．Butt