溶血试验红细胞脆性增高.ppt

红细胞酶缺乏症 根据我们对广东、云南、贵州的傣、壮、瑶、景颇、苗、纳西、仡佬、彝、白、哈尼、水、布依等少数民族的G6PD基因突变型的检测以及海南对黎族的调查和我国港台地区、海外华裔的报道,都证明G1388A和G1376T是中华民族的两种特有的和主要的G6PD突变型。从而从分子进化水平证明中华民族的统一起源,也为人类基因组多样性计划提供了有价值的资料。 从酶方法学来看,我国先后引进、改进和建立了一系列的检测方法,包括MHb-RT、MHb-RT微量组化洗脱法、谷胱甘肽稳定性试验、荧光斑点法、硝基四氮唑蓝定性和定量法、快速分光光度法等。现在建议推广的G6PD/6PGD(6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶)比值法,方法简便,能检出约70%的杂合子,具有明显的优点。 此外,根据WHO推荐改进的酶动力学检测方法也已经推广应用。除G6PD缺乏外,尚有20多种红细胞酶缺乏或过多可以诱发溶血,其中23种酶和谷胱甘肽(GSH)检测法也已在我国建立,这对鉴别各种不同病因的非球形红细胞溶血性贫血起了重要作用。 从临床角度,目前本病对人类健康最有威胁的表现是新生儿黄疸导致核黄疸致智力低下或死亡。“七五”期间,我们对此进行了系统研究,采取了综合性预防措施,使原来因G6PD缺乏导致核黄疸的发生率由12.4%降至0.9%，这一成果已经在华南地区得到推广。 在G6PD缺乏症的研究方面还有下述人们关注的问题: 　　1　在大量G6PD基因突变报告后,Beulter提出突变热点在与底物葡萄糖-6-磷酸(G6P)和辅酶Ⅱ(NADP)结合处,即在第6和第10外显子处。但近期的报告显示,G6PD缺乏症的突变几乎遍及所有的外显子。可能的解释是,G6PD的分子呈立体构型,由于折叠使突变部位接近底物。虽然Rowlan(1996)提出了人类G6PD的三级结构模式,Vulliamy等(1998)证明外显子10参与编码β折叠,因而参与形成G6PD二聚体的接触面,此区突变影响二聚体形成,而只有二聚体才有酶活性。但其他外显子突变影响酶活性的机制还有待G6PD的三级和四级结构的阐明。 　2　G6PD基因是一个看家基因(house-keeping gene),即在许多组织都能表达的基因。但它的缺乏何以只在红细胞系表现溶血症状？多年来人们很有兴趣探讨此酶缺乏与其他疾病的关系。例如,发现G6PD缺乏与病毒性肝炎、白血病、上呼吸道感染、出血性疾病、骨关节炎、类肉瘤病、各种肿瘤甚至衰老的发生有关。但这种相关是一种关联(association)或连锁(linkage)关系抑或是因果关系很值得探讨。 3　G6PD缺乏症的动物模型一直是人们关注的问题。动物模型的建立不仅对研究基因调控和表达、探讨此酶缺乏究竟与其他相关疾病有无及有何种关系以及G6PD诱发的各类溶血机制研究有关,而且对评价已经和正在陆续发现的新药及食物是否会诱发溶血也是不可缺少的研究手段。过去已有若干自然突变形成的动物模型,如马、GPDX小鼠、大鼠、羊等，这些动物模型不是与人类G6PD缺乏症有差异,就是保留不当而绝种。1995年后已经有几个实验室用构建载体、同源重组、转基因等现代分子生物学手段复制模型,据报告已基本成功，但还未见到应用方面的报告。这无疑将成为G6PD研究深入的一个重要方面。 4　人类基因组计划的一个重要组成部分是“人类基因组多样性项目”。我国有56个民族,构成了多样性的丰富资源。揭示G6PD基因突变的异质性和多态性,不仅可以为这一庞大的计划增砖添瓦,而且对从分子进化这一微观领域探讨中华民族进化、渊源、迁移、变迁提供有价值的资料。我们和云南虽然在这方面做了一些尝试,但还有许多工作需要深入和扩展。 5　蚕豆病仍然有许多疑点没有解决。最使人感到困惑的是,为什么有的小孩只吃几粒蚕豆,甚至婴儿吮食母乳会发病？为什么G6PD缺乏者不是每次吃蚕豆都发病,尽管有时食量还很大？虽然目前已经提出了一些“蚕豆毒素”,特别是西方学者认可的蚕豆嘧啶和蚕豆嘧啶核苷是本病致溶血的直接原因。但据估计,这些化合物在蚕豆中含量很低,干蚕豆更低，引起溶血需要进食大量蚕豆,这与实际情况相去甚远。我们根据一些实验室材料曾提出过蚕豆毒素在体内“增量”的见解［见“蚕豆病”(人民卫生出版社,1987年)］,但未能继续研究证实。 G6PD 缺乏症虽然已经研究了40多年，但是仍然有许多值得深入探讨的问题，希望有志者，任重而道远，在21世纪继续努力往前！ 珠蛋白生成障碍性 贫 血 thalassemia 珠蛋白生成障碍性贫血（地中海贫血又称海洋性贫血）是一组遗传性溶血性贫血。其共同特点是由于珠蛋白基因的缺陷使血红蛋白中的珠蛋白肽链有一种或几种合成减少或不能合成。导致血红蛋白的组成成分改变，本组疾病的临床症状轻重不一，大多表现为慢性进行性溶血