树突状细胞对口蹄疫灭活病毒的泛素化作用研究.pdfVIP

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会 2．通过对仔猪免疫程序的研究，结合母源抗体的监测结果，推荐仔猪的免疫程序；30日 龄首免肌肉注射lml口蹄疫疫苗(Ⅱ)，间隔i5天后加强免疫2ml口蹄疫疫苗(II)，120 日龄再免疫2ml口蹄疫疫苗(Ⅱ)。 参考文献略 树突状细胞对口蹄疫灭活病毒的泛素化作用 石玮逍海霞李杰王蒙鑫 (河北农业大学动物科技学院保定河北071000) 擅要树宪状细胞(Dend^ticcell，Dc)是体内最强大的抗原提呈细胞。但目前尚不清楚Dc提呈口蹄疫 dise∞e 病毒(如ol枷d-mouIllvim是FMDv)抗原的分子机制．奉试验通过制备BALB，c小鼠单核细胞塬DC， 构建DC与灭活FMDv的体外作用系统，收获加栽灭活FMDv后不同时问的Dc。制备Dc裂解液，用 sDs．PAGE和we盘州IBlo位in空法研究灭活FMDv抗原是否被泛素化．结果发现，在将灭活FMDv加载于 抗体标记．也可被单链泛素化抗体标记，但由多链迓素化抗体标记的泛素化蛋白的量明显多于单链泛素化 抗体所标记的泛素化蛋白含量．说明灭活FMDv抗原被Dc加工的过程包括泛素化事件，并且迓素化FMDV 两种不同方式对FMDv抗原进行加工处理． 关键词 口蹄疫灭活病毒；树突状细胞；泛素化现象 口蹄疫(协ot．and．moulll 猪、羊等偶蹄动物的一种急性、烈性传染病，其免疫病理学机制尚不十分清楚t 分布于皮肤和粘膜中的树突状细胞(dendriⅡccen，Dc)不仅是多种病原体的捕获者- 而且当其迁移至引流淋巴结后即启动机体的适应性免疫应答。给小鼠滴鼻接种灭活FMDV疫 苗后取鼻咽部引流淋巴结，迸行树突状细胞的观察，发现接种灭活FMDV疫苗的小鼠淋巴结 内树突状细胞的数量明显多于对照组，这表明鼻咽部粘膜中的Dc就是FMDv的抗原提呈细 胞，但目前尚不清楚DC加工、提呈肿v抗原的机制。 DC是目前已知的抗原提呈细胞中唯一具有主要组织相容性抗原分子(Major。 I histocompa土ibil时cl豁s 提呈灭活病毒抗原的免疫细胞f1珥。所有的DC亚群．通常都能够有效地进行抗原处理和提呈 【3J。它们通过摄取抗原，并将抗原肽降解成多肽后与MHcI类或MHCII类分子结合，然后再 提呈给T细胞，从而引起免疫应答。根据参与的MHc分子不同．将抗原在细胞内的加工处理 分为MHCI类途径和姗CⅡ类途径…。 一般说来，MHCI类途径主要是加工处理内源性抗原，泛素化抗原在胞质内经蛋白酶 I类分子结合，再经 体(口roteasome)降解形成多肽后，转移至内质网腔内与新组装的Ⅻc 高尔基体转运到细胞膜上【4”。因此，MHC I类途径又被称为泛素一蛋白酶体途径(the 过Ⅷc．I提呈内源性抗原，而且也可通过MHc．Ⅱ和cDl分子交叉提呈抗原9。1，并调节吞 噬过程和MHC分子的表达睁“。目前对蹦DV抗原的研究报道较多【ll，“J。但尚不清楚DC提 呈F^dDv抗原的细胞分子机制旧．本试验在我们明确了DC就是FMDV抗原提呈细胞的基础 上，通过对荷载灭活舳v抗原的DC进行泛索化蛋白检测，以期阐明DC加工灭活Fh仍V抗 原的分子机制。 材料与方法 l制备BALB，c小鼠单核细胞源树突状细胞 1．1实验动物 BALB，c小鼠(6—8周龄)购自河北医科大学实验动物中心(合格证编号605176)，饲养于 195 猪的传染病 河北农业大学实验动物房，室温(23士2)℃．供给全价饲料，自由采食、饮水； 1．2实验方法 1．2．1外周血单个核细胞的分离 在无菌条件下，用摘眼球的方法获得BALB，c小鼠外周血，再用聚蔗糖．泛影葡胺分离 法得到单个核细胞： dendritic cell，MoDc)的制备 1．2．2单核细胞豫树突状