桑黄液态发酵培养基研究及其多糖分子量测定研究.pdfVIP

发酵工程学科的进展 ——第四次全国发酵工程学术讨论会论文集 桑黄液态发酵培养基研究及其多糖分子量测定 林百全。，余晓斌， 洪玉涛 (江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室，元锡214036) 摘 要：研究了桑黄液态培养产胞外多糖培养基，Plackctt-Burman设计法筛选出影响胞外粗多糖 产量的主要因素．继而采用中心组合设计及响应面分析确定主要影响因子的最佳浓度。通过实 验发现当豆饼粉3．7％、玉米浆粉0．6％、cacho．27％时，胞外粗多糖产量达到6．789／L的最大值， 较优化前的5．249／L提高了29．4％。另外，本文还对其对桑黄胞内外多糖分子量进行了测定。 关键词：桑黄菌，胞外多糖，分子量 桑黄菌(Phellinuslinteus)属担子菌亚门、多孔菌科、木层孔菌属[1]，又称桑臣、桑 耳、胡孙眼、鲍氏层孔菌、针裂蹄(裂蹄)，是一种珍贵的药用真菌，有“森林黄金”之美称。 现代医学研究表明，桑黄含有多糖、黄酮、香豆素类化合物、落和叶松草酸、麦角甾 醇、氨基酸等多种有效成分[2‘‘]。野生子实体的多糖提取物对小鼠肉瘤S180的抑制率为 96．7％[51。Hwan—Mook KIM等‘63用Phellinuslinteus的菌丝体胞外多糖(EPS)进行免 疫学实验，发现EPS不仅能够使T细胞增殖，而且对不同同类抗原的T细胞也有增殖作 用，并且毒性T淋巴细胞的毒性在加桑黄胞外多糖(EPS)后大大增强。 桑黄是目前国际公认的生物抗癌领域中药效非常好的药用真斟7]，已成为药用真菌研究 领域的一个热点。传统上桑黄的活性成分是从子实体中提取，但受生理生态的特殊性和复杂 性以及外部环境条件的制约，造成在自然界中形成子实体稀少，特别是形成可用子实体需要多 年，人工栽培难度较大，资源匮乏。所以，桑黄的开发和利用也受到限制。本文主要采用SAS 软件对桑黄菌的液体发酵培养基做了较深入研究，以提高桑黄胞外多糖的产量。 1 材料与方法 1．1材料 桑黄菌株(Phellinuslinteus)由本实验室筛选保存。 1．2方法 · 粗多糖提取胞外多糖：取除去菌丝体的培养液离心，留上清液，上清液浓缩至1／4，加 乙醇沉淀。洗涤后，60℃烘干称重，计算公式为：粗多糖含量(g／mL)=粗多糖干燥物重 (g)／培养液取样体积(mL) 胞内多糖：发酵液过滤后所得的湿菌丝体洗涤三次，加水充分破碎后在80℃热水中 浸提2小时，抽完后离心，并把滤渣再热水浸提1小时，再次离心，然后合并这两次滤液， 作者简介：林百全(1980一)。男，发酵工程硕士研究生． *责任作者．通讯联系人：0510-xbyu(9sytu．edu．cn 476 第四次全国发酵工程学术讨论会 浓缩至原体积的1／4，加乙醇沉淀。洗涤后，60℃烘干所得即胞内多糖。 1．3相对分子质量测定 采用高效凝胶过滤色谱法(HPGFC)测定多糖相对分子质量。色谱条件：色谱柱为 Linear300 mm×7．8 Ultrahydrogel 钠溶液，体积流量为0．9mL／min，柱温45℃，示差折光检测器检测。 1．4培养基优化 用SAS软件设计二水平实验筛选重要影响因素，再用响应面分析法对重要因素的水 2。 平进行优化。发酵培养基中其它组成为(g／L)：蔗糖40、玉米粉10、麸皮3、KH。POt 试验重复二次，获得的胞外粗多糖产量响应值平均值用SASRSREG程序进行分析。 2．结果与讨论 2．1二水平设计 二水平设计选取蔗糖、豆饼粉、玉米粉、KH：PO。、CaCl2、麸皮六个因素、试验次数为 作用的一级作用。结果表明豆饼粉、玉米浆粉、CaCh对多糖产量有显著影响。因此，利 用响应面分析对豆饼粉、玉米浆粉、CaCh三个培养基组分进行更深入研究。 2．2响应面分析 2．2．1实验设计与结果：二水平设计试验确定了3因素，即豆饼粉(X1)、玉米浆粉(X2)、 因素3水平共15个试验点的相应面分析实验，在中心